一、缺血再灌注损伤诱导大鼠视网膜细胞凋亡（论文文献综述）
韩昀[1]（2021）在《细胞外RNA/TLR3信号通路及RNase在视网膜缺血再灌注损伤中的作用及机制研究》文中认为研究背景及目的视网膜缺血再灌注损伤（Ischemiareperfusion injury,IRI）是眼科疾病常见的病理生理过程,多发生于急性闭角型青光眼（acute angle-closure glaucoma,AACG）、糖尿病视网膜病变（diabeticretinopathy,DR）、视网膜动静脉阻塞等疾病[1,2]。目前,视网膜IRI的确切机制仍不清楚,虽然有许多新方法和新技术应用于视网膜IRI相关疾病的诊治,但临床治疗效果欠佳,因此,寻找安全有效的减轻视网膜损伤的方法,具有重要的临床价值。研究证实,TOLL样受体（Toll-likereceptor,TLR）3介导的免疫调控是机体应对应激反应的第一道防线。越来越多的证据表明,TLR3介导的炎性和凋亡机制在心、肝、肺等脏器缺血再灌注（Ischemiareperfusion,I/R）损伤中发挥重要的作用,而细胞外 RNAs（Extracellular RNAs,exRNAs）包括双链 RNA（Double-stranded RNA,dsRNA）作为 TLR3 的内源性配体,通过激活 TLR3 信号通路调控I/R损伤的发生发展;同时,核糖核酸酶（Ribonuclease,RNase）作为exRNAs的水解酶,对I/R引起的脏器损伤有一定的保护作用。因此,本研究的目的是探讨exRNAs/TLR3介导的信号通路在视网膜IRI中的作用,以及RNase处理是否可以减轻视网膜IRI。方法选用C57BL/6J野生型（WT）小鼠和TLR3基因敲除小鼠建立视网膜I/R模型,采用RNA提取试剂盒提取血清总的RNA后用分光光度仪测定exRNAs的浓度;使用RNA选择性的绿色荧光标记技术检测组织中exRNAs的表达;RT-qPCR及Western-blot分别检测TLR3、胶质细胞纤维酸性蛋白（Glial fibrillary acidic protein,GFAP）、Caspase-3及炎性因子的表达;视网膜组织切片免疫荧光双标检测dsRNA/TLR3的表达;TUNEL法检测细胞凋亡;HE染色观察视网膜各层组织结构的变化。复苏原代Muller细胞后,进行Muller细胞传代培养和转染,用MTT法检测细胞活力,物理气箱法进行Muller细胞缺氧复氧（H/R）处理,收集Muller细胞后,免疫荧光双标检测dsRNA/TLR3的表达,免疫荧光单标法检测GFAP的表达,并采用RT-PCR方法检测Caspase-3及炎性因子的表达,TUNEL法检测Muller细胞凋亡情况。结果WT小鼠I/R后视网膜组织中TLR3和GFAP的表达水平明显增多,炎性因子表达增加,凋亡因子和TUNEL凋亡指数明显升高,视网膜损伤加重;给予TLR3抑制剂处理后,视网膜组织中TLR3和GFAP的表达水平明显减少,炎性因子表达下降,凋亡指数降低,视网膜损伤减轻;TLR3基因敲除显着的下调了视网膜组织中GFAP的表达,减少了炎性因子的生成,降低了凋亡指数,减轻了视网膜IRI。Muller细胞H/R后细胞中TLR3和GFAP的免疫荧光表达明显增多,炎性因子表达增加,TUNEL凋亡指数显着升高,细胞活力下降;抑制TLR3的表达后,显着的降低了 GFAP的免疫荧光表达水平,减少了炎性因子的生成,降低了TUNEL凋亡指数,提升了 Muller细胞的活力。WT小鼠I/R后视网膜组织中exRNAs及dsRNA的表达明显增多,给予RNase处理明显降低了 exRNAs及dsRNA的生成,下调了 TLR3和GFAP的免疫荧光表达,减轻了炎性因子的表达,减少了组织的凋亡,减轻了 I/R导致的视网膜损伤。结论TLR3介导的炎性机制和凋亡机制参与了视网膜IRI的病理生理改变,抑制TLR3表达或敲除TLR3基因均可显着的减轻视网膜IRI的发生。同时,研究发现增多的exRNAs包括dsRNA通过激活TLR3信号通路,促进了视网膜I/R导致的损伤,给予RNase处理可显着抑制机体的炎症反应和细胞凋亡,对视网膜IRI有一定的保护作用。
龙河[2]（2020）在《原发性闭角型青光眼视神经缺血-再灌注损伤的临床研究》文中进行了进一步梳理目的:应用光学相干断层扫描血管成像（OCTA）观察原发性闭角型青光眼（PACG）高眼压控制后视盘及黄斑区结构与血流的特点。方法:前瞻性研究。纳入确诊为PACG患者27例（38只眼）为研究对象,药物和手术控制眼压在最大的稳定范围以内（21mm Hg以下）,24h眼压基线稳定。眼压控制后1天、1周、1个月,观察不同时间点最佳矫正视力（BCVA）、眼压、视野平均缺损（VF-MD）、视网膜神经纤维层（RNFL）厚度、黄斑节细胞复合体（GCC）厚度、脉络膜厚度（CT）、视盘全周浅层视网膜血管密度（SVD）、视盘周围不同区域浅层视网膜血管密度、黄斑整体浅层视网膜血管密度、黄斑不同区域浅层视网膜血管密度的变化。结果:（1）眼压控制后1周、1个月的BCVA较眼压控制1天明显提高,差异有统计学意义（P<0.05）,而眼压控制后1个月比1周时有提高,差异无统计学意义（P>0.05）。VF-MD在眼压控制后1周无明显变化,在眼压控制后1个月显着减小,差异有统计学意义（P<0.05）。（2）眼压控制后1天、1周、1个月的MOPP均较入院时的MOPP有明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）,而MOPP在眼压控制后1天、1周、1个月两两相比差异无统计学意义（P>0.05）。（3）眼压控制后1周、1个月的平均RNFL厚度、平均GCC厚度、CT均低于眼压控制后1天,差异均有统计学意义（P<0.05）。（4）视盘总SVD、视乳头总SVD及视盘周围总SVD在眼压控制后1天、1周、1个月随时间变化逐渐下降（P<0.05）。视盘旁颞侧、上方SVD,视盘周围颞侧SVD在眼压控制后1周、1个月与眼压控制后1天相比,明显减低,差异有统计学意义（P<0.05）,然而眼压控制后1个月较1周无明显变化,异常无统计学意义（P>0.05）。视盘周围上方SVD在眼压控制后1周无明显变化,眼压控制后1个月低于眼压控制后1天,差异有统计学意义（P<0.05）。视盘旁区下方、视盘周围区鼻侧及下方SVD在眼压控制后1天、1周、1个月均无明显变化（P>0.05）。（5）黄斑整体SVD、旁中心凹及其颞侧和上方的SVD、中心凹周围及其颞侧和上方的SVD在眼压控制后1天、1周、1个月随时间变化逐渐下降（P<0.05）。而旁中心凹鼻侧及下方的SVD、中心凹周围鼻侧及下方的SVD在眼压控制后1天、1周、1个月均无明显变化（P>0.05）。（6）相关性分析:视盘周围及黄斑总SVD的减低与平均RNFL厚度（r=.789.696,P=.000.002）、平均GCC厚度（r=.675.491,P=.003.046）、MOPP（r=.729.566,P=.001.018）均呈正相关,与眼压升高持续时间呈负相关（r=-.603-.569,P=.010.017）,与性别、年龄、眼压、VF-MD均无明显相关性。视盘周围及黄斑区其他不同区域SVD与以上因素均无明显相关性（P>0.05）。结论:（1）PACG患者眼压控制后1个月BCVA、MD、MOPP明显增加,RNFL厚度、GCC厚度、脉络膜厚度、视盘及黄斑血管密度均持续性降低,且血管密度与RNFL厚度、GCC厚度、MOPP呈正相关,与眼压升高持续时间呈负相关。（2）PACG患者眼压控制1个月内,视神经仍在持续损害,此阶段视神经保护干预治疗至关重要。
陈前波[3]（2019）在《阿克苷通过miR-342-3p/OPTN分子轴及下游PI3K/AKT信号通路调控RGC-5细胞自噬和凋亡的作用机制研究》文中研究说明[背景]青光眼（glaucoma）是一组以特征性视神经萎缩和视野缺损为共同特征的疾病,病理性眼压增高是其危险因素,其中最核心的问题是青光眼性视神经病变。作为继白内障之后全球第二位致盲眼病,青光眼严重威胁着人类的视觉健康。因为一些体内、外不良因素的诱导或刺激造成眼压的升高或大幅度波动,如果眼压的变化超过了眼球内组织,尤其是视网膜视神经所能承受的限度,将给眼内组织尤其是视神经及其视觉通路和视觉功能带来损害,最典型和最突出的表现是视盘的凹陷性萎缩和视野的特征性缺损缩小。如不及时采取有效的治疗,视野可以全部丧失终至失明。青光眼视神经损害临床上表现为特征性的视神经萎缩,是神经节细胞轴突变性的直接表现,所有类型青光眼的主要病理学特征都是视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells,RGCs）的死亡。长期以来青光眼的发病机制可以归纳为两大类:机械压力学说和血管缺血学说。机械压力学说强调眼压作用,认为眼压升高引起筛板各层变形移位产生剪切力,使视网膜神经节细胞（RGCs）轴浆流阻滞于筛板区,轴突蛋白的生成和转运减少阻碍了脑源性神经营养因子的获得,最终导致RGCs凋亡。而血管缺血学说认为,由于各种原因引起视乳头微循环障碍,导致视乳头及其周围组织营养物质供应减少,RGCs轴突即视神经纤维缺血缺氧并最终凋亡。由于RGCs破坏后不能再生,RGCs的死亡将导致视力的永久性丧失。临床上青光眼的治疗主要采用降眼压类药物或手术方式,其主要目的在于控制眼压,然而部份患者虽然眼压控制良好,但视野仍然出现进行性丢失并最终导致盲。由此可见单纯的降低眼压并非能完全控制青光眼患者RGCs的丢失。随着对青光眼视神经损伤机制和病理生理过程的深入研究及认识,在临床治疗中尽早的采取抑制RGCs死亡,促进神经修复和视神经保护的治疗措施,成为改善视神经病变患者视力的重要途径,得到了临床医生的高度重视,已成为目前视神经保护研究的重点及难点。阿克苷（C29H36015）是苯丙素总苷的主要成分,来源于云南苦丁茶。本课题组前期研究发现,阿克苷对损伤模型RGCs具有保护作用。在大鼠慢性高眼压模型和视神经钳夹伤模型中,给予阿克苷治疗后,RGCs数量较对照组有明显的增加,同时RGCs特异性标志物Thy-1的表达水平也显着高于对照组,证明了阿克苷可以减少RGCs凋亡。在大鼠视网膜再灌注损伤模型中,阿克苷能促进细胞形态恢复,减少RGCs凋亡,减轻视网膜缺血再灌注损伤。为了进一步研究阿克苷对RGCs的保护作用,我们发现缺血再灌注损伤后阿克苷显着下调RGCs的LC3和Beclin-1的表达,上调p62蛋白表达。同时,应用阿克苷联合自噬抑制剂3MA作用于RGCs细胞,发现阿克苷可以下调OPTN的表达并抑制LC3的表达,而自噬激动剂雷帕霉素（Rampamycin）可以上调OPTN的表达。说明阿克苷可能通过下调OPTN自噬受体从而抑制自噬。但阿克苷是怎样通过OPTN调控RGCs细胞的自噬?有待进一步研究。[目的]在体外水平探究阿克苷调控细胞自噬对视网膜神经节细胞RGC-5的保护作用,及其分子机制。[方法]1、体外培养RGC-5细胞,采用浓度梯度的CoCl2处理,构建RGC-5细胞氧化应激损伤模型。用0、10、20、40、80、160、320 μmol/L的CoCl2处理细胞,探索构建损伤细胞模型的合适浓度。采用高中低三种不同浓度的阿克苷处理氧化应激损伤的RGC-5细胞,检测阿克苷对CoCl2损伤的RGC-5细胞的保护作用。2、应用CCK-8、透射电镜及流式细胞仪检测阿克苷对RGC-5细胞增殖、自噬和凋亡的作用。3、Affymetrix microRNA表达谱芯片检测阿克苷促进RGC-5细胞损伤修复过程中miRNA的差异表达。将冻存细胞从液氮中取出后,在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。经离心、清洗、接种并放于培养箱中培养。当传代培养使用时清洗后以吸管上下吸放数次以打散细胞团块,混和均匀后,补足3n（n为传代瓶数）ml培养基（MEM）,依稀释比例转移至新的培养瓶中,并放入CO2培养箱培养。按照Affymetrix microRNA表达谱芯片提供的杂交操作流程采用相应的杂交Gene Chip Hybridization Wash and Stain Kit试剂盒对RNA样品和芯片进行杂交结合,根据试剂盒操作说明;配制杂交反应液,加入到上述生物素标记的样品中;采用Gene Chip-Scanner-3000 进行结果扫描,以及 GeneChip Command Console Software5.0读取结果。4、差异miRNA（miR-342-3p）与其靶基因OPTN的靶向作用关系检测。应用双荧光素酶报告基因检测miR-342-3p与OPTN的靶向作用。构建用于双荧光检测的野生型和突变型OPTN重组质粒（pmirGLO-OPTN-WT/MUT）,与miR-342-3p mimics共转染到HEK293T细胞,对照组用miR-342-3p scramble阴性对照与OPTN的野生型或突变型重组质粒共转染。按荧光素酶活性检测试剂盒（Promega）操作说明,检测荧光相对强度。5、miRNA-342-3p与OPTN的过表达或敲降转染。采用miR-342-3p mimic或inhibitor对miRNA-342-3p进行过表达或敲降转染;采用pcDNA3.1-OPTN重组质粒或OPTN敲降序列sh-RNA-OPTN对OPTN进行过表达或敲降转染。其中,miR-342-3p的过表达或敲降转染以miR-scramble为对照;OPTN的过表达转染以空载质粒作为对照,敲降转染以nonsence shRNA转染作为对照;每组转染实验组设置NC对照,每个实验组设3个复孔。6、应用 qRT-PCR、Western blotting 检测 RGC-5 细胞中 miR-342-3p 与 OPTN 表达的影响。离心后收集各组细胞,采用Trizol法裂解和抽提各组RRGC-5细胞的中的总RNA。应用逆转录试剂盒进行逆转录,并采用SYBR Green Master Mix实时荧光定量PCR试剂盒进行相对表达检测。应用Western blotting检测阿克苷对RGC-5细胞中OPTN的表达情况。7、应用Western blot实验和免疫荧光实验和检测RGC-5细胞中PI3K/AKT/mTOR通路及自噬相关蛋白表达的影响。提取细胞总蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳,Western blot反应检测RGC-5中PI3K/AKT信号通路及自噬相关蛋白（Beclin-1、Soluble-p62、Insoluble-p62、LC3-Ⅰ/Ⅱ）、细胞凋亡相关蛋白（caspase3 和 caspase7）等的表达。制备细胞爬片,4%多聚甲醛固定,免疫荧光检测自噬标志Beclin-1、LC3Ⅱ的表达。[结果]1、阿克苷对RGC-5细胞损伤的保护作用。用30μmol/L的CoCl2干预RGC-5细胞24h构建RGC细胞损伤模型显着抑制了 RGC细胞的增殖活力,促进细胞的凋亡水平。电镜检测结果表明,CoCl2损伤组RGC-5细胞的自噬水平显着升高,自噬小体的含量显着高于正常细胞组,Westernblot和免疫荧光检测结果表明,损伤组细胞Beclin-1的表达显着上调,可溶性p62蛋白显着升高,不可溶性p62明显降低,Ⅱ型LC3蛋白的转化也显着高于对照组。三组浓度的阿克苷处理均显着促进了 RGC-5细胞增殖活力、降低了细胞损伤后的自噬和凋亡水平。2、阿克苷显着上调RGC-5细胞中miR-342-3p的表达。microRNA Array 4.0芯片,对正常对照组、CoCl2损伤组、阿克苷处理组RGC-5细胞进行miRNAs表达分析结果表明,阿克苷组RGC-5细胞有64个miRNAs差异表达,上调的miRNAs有41个,上调倍数最大的是miR-342-3p,上调倍数为4.65。3、敲降miR-342-3p显着降低了阿克苷对RGC-5细胞的保护作用。与阿克苷组相比,阿克苷+敲降miR-342-3p组显着降低了 RGC-5细胞的增殖活力促进了 RGC-5细胞的自噬和凋亡水平。免疫荧光和Western Blot检测自噬相关蛋白发现敲降miR-342-3p组RGC细胞Beclin-1的表达显着上调,可溶性p62蛋白显着升高,不可溶性p62明显降低,Ⅱ型LC3蛋白的转化水平升高。4、miR-342-3p靶向负调控OPTN的靶向作用。starBase数据库的预测结果表明,OPTN可能是miR-342-3p的靶基因。双荧光素酶报告基因实验结果表明,OPTN野生型载体中,对照组与miR-342-3pmimics组RGC-5细胞的荧光素酶活性分别为 10.044±0.462、4.820±0.284（t=5.685,P=0.008）;而 OPTN 突变型载体中,对照组与miR-342-3p mimics组RGC-5细胞的荧光素酶活性分别为10.015±0.439、9.957±0.514（t=0.402,P=0.859）。5、阿克苷通过miR-342-3p/OPTN分子轴调控RGC-5细胞增殖、自噬及凋亡。与损伤模型组（NC组）RGC-5细胞相比,过表达OPTN组RGC-5细胞的增殖活力受到显着抑制、细胞的凋亡和自噬水平进一步显着升高;与阿克苷组相比,阿克苷+过表达OPTN组显着降低了阿克苷对损伤细胞的保护作用,阿克苷+过表达miR-342-3p+过表达OPTN组与阿克苷组的检测结果在细胞增殖活力、凋亡和自噬方面无明显差异。6、阿克苷通过激活PI3K/AKT/mTOR通路抑制RGC-5细胞自噬。Western blot结果显示,阿克苷或3-MA均能够单独同时激活PI3K和AKT,进而导致RGC-5细胞的自噬受到抑制。阿克甙处理显着降低了雷帕霉素诱导的细胞自噬。并且阿克苷与自噬抑制剂3-MA共同联用对细胞中自噬体的数量的降低作用与单独使用相比,具有更强的效果。7、阿克苷通过OPTN与PI3K/AKT/mTOR通路的协同作用抑制RGC-5细胞自噬而降低RGC-5细胞凋亡水平。[结论]1.阿克苷促进损伤的RGC-5细胞增殖,抑制RGC-5损伤导致的细胞自噬和凋亡2.阿克苷显着促进损伤的RGC-5中miR-342-3p的表达。3.阿克苷通过上调miR-342-3p/OPTN分子轴促进RGC-5细胞增殖,抑制细胞自噬及凋亡。4.阿克苷通过激活PI3K/AKT信号通路降低RGC-5细胞的自噬和凋亡。5.阿克苷通过促进OPTN和PI3K/AKT信号通路的协同作用,实现对RGC-5细胞的保护作用。
江梦南[4]（2019）在《刺激迷走神经在急性高眼压模型诱导的视网膜缺血再灌注损伤中神经保护作用及机制研究》文中提出第一部分 程序性坏死在前房灌注急性高眼压引起的视网膜缺血再灌注损伤中的作用目的:探讨前房灌注急性高眼压引起的视网膜缺血再灌注损伤的模型的形态、电生理功能及下游分子机制。方法:将成年C57小鼠随机分为三组:对照组、视网膜缺血/再灌注（I/R）组和TAK-632+视网膜缺血再灌注（I/R+TAK-632）组。I/R组小鼠右眼持续前房灌注高压生理盐水1小时后恢复眼压1小时。选取再灌注后6小时,12小时、24小时及72小时和7天五个时间点取双眼视网膜。使用免疫荧光染色制作小鼠视网膜铺片,观察不同时间点视网膜各层结构细胞形态及数量的变化;测量C57小鼠暗适应条件下闪光全视网膜电图（f-ERG）,观察各组视网膜功能变化情况;测量MLKL、p-MLKL、caspase-8和caspase-3等蛋白蛋研究视网膜缺血再灌注中程序性坏死的作用。同时使用RIPK1/3蛋白抑制剂:TAK-632,对小鼠进行玻璃体腔注射,来观察程序性坏死在早期（24小时）和晚期（7天）视网膜缺血再灌注模型中的作用。结果:与对照组相比,小鼠急性高眼压模型中,视网膜缺血再灌注损伤24小时和72小时时间点,RGCs数量出现明显差异（P<0.05;n=8）;6小时与12小时的I/R组与对照组相比较,RGCs的数量无明显差异。在视网膜铺片,24小时及72小时时间点出现了RGCs的减少（P<0.05,n=8）。检测视网膜功能,我们以右眼急性高眼压处理,自身左眼为对照眼,分别进行暗适应下闪光全视网膜电图（ERG）检测。其中6小时左右两组全视网膜电图无差异;在12小时、24小时和72小时后可见,b波振幅相较于对照眼,开始出现下降（P<0.05,n=4）,而a波则在24小时和72小时出现了振幅的下降。WB测量视网膜中凋亡及程序性坏死相关的蛋白,caspase-8的含量在视网膜I/R损伤后的72小时视网膜中开始出现;MLKL在视网膜中的含量则在24小时和72小时出现显着下降（P<0.05,n=4）;而p-MLKL则在模型组中较对照组含量升高,升高的幅度在24小时达到顶峰,而后于72小时下降（P<0.05,n=8）。在视网膜缺血再灌注损伤后24小时视网膜中caspase-3的活性并无明显升高,而在7天后则出现明显的的c-caspase-3升高（P<0.05,n=8）。使用TAK-632抑制RIPK1/3后,TAK-632+I/R组中RGCs数量较I/R组上升,损伤7天后RGC细胞数量则较空白对照组明显下降（P<0.05,n=8）。结论:在前房灌注引起的视网膜缺血再灌注损伤模型中,视网膜神经节细胞出现减少,其数量下降随时间呈渐进性增长,最早出现在约24小时;而视网膜功能的下降较视网膜神经节细胞数量下降提前。该模型引起的视网膜神经节细胞的减少早期可能是通过程序性坏死引起的,并可通过抑制程序性坏死保护视网膜神经节细胞,但无法抑制晚期引起的视网膜神经节细胞的凋亡。第二部分刺激迷走神经降低急性高眼压模型引起的视网膜功能损伤和缺血再灌注损伤目的:探讨在前房灌注急性高眼压模型中,刺激颈部迷走神经对视网膜神经节细胞的保护作用,并研究其对视网膜神经节细胞的缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法:先将成年SD大鼠分为两组,空白对照组（n=2）及迷走神经刺激（VNS）组（n=12）,选取颈部迷走神经刺激时间点0小时、6小时及72小时作为三个时间点,通过标记元癌基因（c-fos）来找到激活的结神经节（NOG）-孤束核（NTS）-上泌涎核（SSN）-翼腭神经节（PPG）神经回路。再将SD大鼠随机分为缺血再灌注模型组（I/R组）和迷走神经刺激+缺血再灌注模型组（I/R+VNS组）,每组设置右眼为实验眼,左眼为对照组。统计视网膜神经节细胞（RGC）数量;测量视网膜电位图（ERG）;测量视网膜中肿瘤坏死因子α（TNF-α）及肠血管活性肽（VIP）水平。此外,测量翼腭神经节中血管紧张肽含量。结果:与对照组相比,刺激迷走神经后VNS组中结神经节、上泌涎核、孤束核以及翼腭神经节中元癌基因c-fos表达含量随着迷走神经刺激时间延长而增加。I/R组和I/R+VNS组对比,I/R组中ERG测定右眼视网膜功能显着下降,下降趋势因迷走神经刺激时间延长而更明显。此外,模型组中视网膜中TNF-α的变化较对照组明显升高。此外,当给与迷走神经刺激后,肠血管活性肽在视网膜和翼腭神经结中表达升高。结论:刺激颈部迷走神经可以保护视网膜,通过调控TNF-α降低视网膜缺血再灌注所受到的损伤,其机理为上调血管紧张肽的表达可激活NOG-NTS-SSN-PPG中枢核团系统,达到保护视网膜神经细胞的作用。
田根全[5]（2019）在《活血通络利水方对RIR大鼠视网膜神经纤维层厚度及AQP4，GLAST，GS表达的影响》文中研究表明目的观察活血通络利水方对急性视网膜缺血再灌注（retinal ischemia reperfusion,RIR）损伤模型大鼠的视网膜神经纤维层的保护作用,以及对水通道蛋白-4（Aquaporin-4,AQP4）、L-谷氨酸/L-天冬氨酸转运体（L-gluta-mate/Laspartate transporter,GLAST,也称EAAT1）以及谷氨酰胺合成酶（glutamine synthetase,GS）表达的影响。方法实验一:25只BN雄性大鼠,随机抽取5只,造高眼压模型,用光学相干断层扫描仪（OCT）观察5只BN大鼠视网膜的神经纤维层厚度随时间的变化情况,找出其变化规律;根据上述实验结果,选择6小时和8周为两个时间观察点,将20只BN雄性大鼠,随机分为4组,分别为正常对照组,模型对照组、中药对照组、银杏叶片对照组,造模给药,然后用OCT观察4组BN大鼠视网膜的神经纤维层厚度随时间的变化情况,来检测中药和银杏叶片的效果。实验二:28只SD雄性大鼠随机分为7组,第一组是正常对照组,其余6组为模型对照组,模型对照组分别选取造模后6小时、12小时、1天、3天、1周、2周的6个时间点的大鼠。然后按6个时间点麻醉处死提取视网膜组织,进行West Blot实验,找出AQP4、GLAST以及GS表达最显着的时间点。2根据上述结果,选择造模后6小时为时间观察点;将16只SD雄性大鼠随机分为4组,为模型对照组、中药对照组、银杏叶片对照组,造模给药6小时后,进行麻醉处死大鼠,提取视网膜组织,进行West Blot实验,从而对比正常对照组、模型对照组、中药对照组、银杏叶片对照组之间AQP4、GLAST以及GS的表达高低的变化关系。结果实验一:1在6小时的时候,神经纤维层厚度增强,表示现在还处于水肿期,而在4周、8周、12周时厚度降低,表明大鼠的由于高眼压造成了神经纤维层的变薄。2采用中药和银杏叶干预后,发现在6小时时其神经纤维层厚度变薄;8周时神经纤维层厚度变薄程度减轻。实验二:1在AQP4、GLAST以及GS表达最显着的时间点为6h,其余时间点比较无显着意义。2在6h时,模型对照组视网膜组织中的AQP4表达最低,中药组与银杏叶片对照组AQP4表达高于模型对照组,但是低于正常对照组,中药组和银杏叶片对照组的差异无显着意义;中药组与银杏叶片对照组GLAST与GS表达低于模型对照组但是高于正常对照组,中药组和银杏叶片对照组的差异无显着意义。结论1活血通络利水方能减轻视网膜缺血再灌注损伤的视网膜初期的水肿程度和视网膜视神经纤维层厚度;长期观察能减少视神经纤维层变薄,保护视神经。活血通络利水方能提高视网膜缺血再灌注损伤AQP4、GS和GLAST的表达水平和活性,从而起到保护视网膜组织的作用。2活血通络利水方能提高视网膜缺血再灌注损伤后AQP4、GS和GLAST的表达水平和活性,从而保护视网膜组织。图5幅;表9;参81篇。
曹玲英[6]（2019）在《枸杞多糖对大鼠缺血再灌注视网膜保护作用的实验研究》文中研究指明目的:（1）探讨枸杞多糖对大鼠视网膜缺血再灌注损伤是否有保护作用（2）枸杞多糖对大鼠视网膜缺血再灌注损伤保护作用可能的机制,为缺血再灌注损伤视网膜的治疗提供理论依据和新的诊治途径。方法:（1）把健康成年雄性SD大鼠55只作为实验对象,体重范围在200-300g,购自南昌大学动物科学研究所,数字表法随机分成空白对照组简称假手术组、缺血再灌注组简称模型组、缺血再灌注模型+枸杞多糖组简称LBP药物组,假手术组5只,其他两组每组25只,每组分总共5个时间点（6h、12h、24h、48h、72h、）,各时间点5只,在室温,给予充足食物与水,12h光照,12h黑夜下适应性生活7天。（2）LBP药物组SD雄性大鼠给与4ml/100g的枸杞多糖溶液灌胃处理（每天一次,连续一周）,模型组SD雄性大鼠和假手术组给与4ml/100g的0.9%氯化钠溶液处理（每天一次,连续一周）。（3）采取动脉夹夹闭大鼠右侧颈总动脉的方式制作视网膜缺血再灌注损伤模型。用动脉夹夹闭模型组、LBP药物组右侧颈总动脉（夹闭1小时）,假手术组只进行手术操作暴露右颈总动脉不夹闭1小时。1小时后逐层缝合切口。（4）分别在缺血再灌注后6h、12h、24h、48h、72h后处理各组SD大鼠,在腹腔注射10%水合氯醛溶液行深度麻醉下处死SD大鼠,制作眼球标本行HE染色,在显微镜下观察视网膜各层形态结构的变化,用免疫组织化学染色的方法检测各组大鼠视网膜活性Caspase-3、Bcl-2及Bax蛋白表达。结果:（1）HE染色结果:视网膜缺血再灌注后6小时,轻度视网膜水肿,视网膜厚度略有增加,神经纤维层和内丛状层水肿淡染,视网膜缺血再灌注后12,24小时,视网膜严重水肿,神经节细胞数减少,内核层较薄,细胞排列松散无序;48小时水肿消失,主要表现为视网膜神经节细胞数继续减少,内核层进一步变薄,可见空泡化;72小时视网膜变薄,视网膜细胞数量减少。与模型组（RIRI组）相比,药物组（LBP组）在6h和12h,24h时视网膜组织水肿缓解;24h,48h和72h较模型组神经节细胞减少较少,视网膜厚度无明显变化。药物组的视网膜各层结构基本上是排列有序的。（2）免疫组化结果:假手术组视网膜活性Caspase-3阳性细胞数为（103.12±12.97个）mm-2,模型组视网膜活性Caspase-3阳性细胞数在灌注后6h开始表达增多,阳性细胞数为（559.03?38.25）个·mm-2,24 h达到较高水平,阳性细胞数为（1528.12?52.74）个mm-2,随后逐渐下降,LBP药物组视网膜各时间点活性Caspase-3阳性细胞数均显着少于缺血再灌注组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。假手术组视网膜可见大量Bcl-2阳性细胞,Bcl-2阳性细胞在缺血再灌注组RIRI后6h开始下降,12h后持续下降,24h下降至较低水平。在每个时间点,药物组中Bcl-2阳性细胞的数量显着高于缺血再灌注视网膜,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。Bax阳性细胞在假手术组大鼠表达较少;在缺血再灌注组中,在RIRI后6小时在神经节细胞层和内核层中观察到Bax阳性细胞,并且在24小时达到更高水平,并且在48小时开始减少。在每个时间点,药物组中的Bax阳性细胞显着少于缺血再灌注组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）结论:（1）枸杞多糖对视网膜缺血再灌注损伤引起的视网膜损伤有保护作用。（2）其保护是抑制视网膜缺血再灌注损伤中的细胞凋亡,其机制是通过上调Bcl-2、下调Bax与Caspase-3表达有关。
黄亮瑜[7]（2019）在《NBP对H2O2诱导的视网膜氧化应激及细胞凋亡抑制作用的研究》文中研究说明研究背景和目的众多眼科疾病涉及到氧化应激损伤,例如:糖尿病视网膜病变、青光眼、视网膜中央动脉阻塞等,这些疾病的诊治错综复杂,因此对疾病机制的探究至关重要,更是为寻找治疗的靶点,以便进行早期的干预和治疗。丁基苯酞（DL-3-n-butylphthalide,NBP）是我国自主研发药物,多数用于缺血性脑卒中所导致的损伤,很多研究表明NBP具有保护细胞缺血缺氧、细胞凋亡等机制,我们将NBP引入眼科,探究NBP对过氧化氢诱导的视网膜氧化应激损伤的保护作用以及其作用机制,可能为我们今后的诊断和治疗提供了新的思路。研究方法1.将18只雌性SD大鼠进行分组,每组6只分成以下三组:正常组、NBP组、PBS组。造模前一周对NBP组进行NBP腹腔注射（浓度剂量为80mg/kg）,PBS组进行PBS腹腔注射（剂量为80mg/kg）。各组均进行前房灌水加压法造急性高眼压小鼠模型,以HE染色、免疫荧光染色,观察实验动物视网膜及视网膜细胞中Nrf2,HO-1的表达。2.本实验选用人Müller细胞系（mio-m1）,经实验后确定H2O2及丁基苯酞的实验用浓度,并分成以下三组:正常对照组（C组）、H2O2模型刺激组（200μmol/L,M组）、NBP治疗组（H2O2200μmol/L+NBP 1μg/ml,N组）刺激时间持续2小时。3.分别采用采用GFAP、GS细胞免疫荧光染色法鉴定Müller细胞系;运用HE染色观察细胞形态;采用噻唑蓝（MTT）比色法检测各组Müller细胞活性;采用Calcein AM染色法测定各组细胞存活率;采用二氯荧光素二乙酸酯（DCFDA）+内质网（ER）红色荧光探针（ER-Tracker Red）染色观察细胞ER中活性氧（ROS）的表达水平;采用JC-1试剂盒对细胞线粒体膜电位进行检测,观察各组Müller细胞膜电位变化;采用Hoechst33258染色观察各组细胞的早期凋亡变化;Nrf2、HO-1免疫荧光染色观察细胞荧光表达,通过Western Blotting记录各组Nrf2、HO-1蛋白的表达量。4.数据分析采用单因素方差分析联合Dunnett统计学方法。结果1.HE染色法中观察大鼠眼部及视网膜情况,并未见到视网膜发生脱离情况;免疫荧光染色观察,与正常组及PBS组相比发现,NBP组可以上调AOH动物模型的Nrf2及HO-1的表达,结果具有统计学意义。2.MTT法检测Müller细胞生长活性及生存力,从24h、48h、72h的数据分析得知:以H2O2进行氧化应激刺激同时给予NBP,能够有效提高Müller细胞的生长活性及生长力,结果具有统计学意义。Calcein AM染色发现NBP能有效提高H2O2作用下Müller细胞存活和生长力,差异有统计学意义。3.Müller细胞Hoechst33258染色结果:C组与M组相比,P1=0.0015,差异有统计学意义;M组与N组相比,P2=0.0359,差异有统计学意义;C组与N组相比,P<0.0001,差异有统计学意义。以H2O2进行氧化应激刺激同时给予NBP,能够有效提高Müller细胞抗氧化应激的能力,减少细胞发生凋亡情况。4.JC-1染色提示:线粒体膜电位荧光强度改变中分析得知,以H2O2进行氧化应激刺激同时给予NBP,能够有效提高Müller细胞抗氧化应激的能力,减少细胞发生凋亡情况,aggregation结果:C组与M组相比,P1=0.0015,差异有统计学意义;M组与N组相比,P2=0.0103,差异有统计学意义;C组与N组相比,P=0.0308,差异有统计学意义。monomer结果:C组与M组相比,P1=0.0002,差异有统计学意义;M组与N组相比,P2=0.0296,差异有统计学意义;C组与N组相比,P=0.0014,差异有统计学意义。5.DCFDA+ER-Tracker Red染色证实H2O2刺激可以导致Müller细胞内ROS表达水平升高,C组与M组相比,P1=0.0020,差异有统计学意义;M组与N组相比,P2=0.0272,差异有统计学意义;C组与N组相比,P<0.0049,差异有统计学意义。以H2O2进行氧化应激刺激同时给予NBP,能使Müller细胞减少ROS堆积于细胞内,降低由于ROS堆积对细胞所造成的损伤。6.细胞免疫荧光染色显示NBP组Nrf2荧光染色强度对比于对照组显着增强,提示NBP可以显着提升Nrf2的表达,结果:C组与M组相比,P1=0.0117,差异有统计学意义;M组与N组相比,P2=0.0491,差异有统计学意义;C组与N组相比,P=0.1607,差异无统计学意义。以H2O2进行氧化应激刺激同时给予NBP,能使Müller细胞核中Nrf2表达升高,说明Nrf2发生了核转位。7.细胞免疫荧光染色显示NBP组HO-1荧光染色强度对比于对照组显着增强,提示NBP可以显着提升HO-1的表达,结果:C组与M组相比,P1=0.0026,差异有统计学意义;M组与N组相比,P2=0.0022,差异有统计学意义;C组与N组相比,P=0.0652,差异无统计学意义。以H2O2进行氧化应激刺激同时给予NBP,能使Müller细胞中HO-1表达升高。8.Western blotting的结果显示NBP组HO-1的表达要高于H2O2刺激组,并且呈现一个时间依赖的变化,用药时间越长,HO-1表达量的增加就更为明显。H2O2作用后2h可观察到Nrf2在细胞核中的易位,48h后可观察到Nrf2在细胞核内表达增高。结论1.NBP可以有效地改善由于H2O2导致的Müller细胞的生物学行为。2.NBP可以增高急性高眼压大鼠视网膜中Nrf2的核转位。3.NBP对于H2O2诱导Müller细胞的保护作用可能是Nrf2通路有关。
汪霄瑞[8]（2019）在《探索自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤在视网膜缺血损伤后的保护作用和机制》文中提出目的:本实验通过构建大鼠视网膜缺血再灌注模型,使用3-甲基腺嘌呤（3-Methyladenine,3-MA）进行玻璃体腔注射的方法,探讨其在大鼠视网膜缺血再灌注后的作用并进并探讨其可能的作用机制,从而为视网膜疾病的早期预防和治疗提供新的思路和依据。方法:1.构建大鼠视网膜缺血再灌注模型通过生理盐水前房灌注法构建视网膜缺血再灌注大鼠模型,将30只SD大鼠随机分为空白对照组（NC组）、假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（IRI组）。采用苏木精伊红（HE）染色观察大鼠视网膜神经节细胞数量变化;Western-blot检测各组自噬相关蛋白LC3、Beclin1在各组大鼠视网膜中的蛋白表达水平。2.探讨3-MA对大鼠视网膜缺血再灌注的作用与机制将40只SD大鼠随机分为4组,每组10只。分别为正常对照组（NC组）、假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（IRI组）、视网膜缺血再灌注+3-MA给药组（IRI+3-MA组）。视网膜缺血再灌注+3-MA给药组（IRI+3-MA组）在按照第一部分方法构建模型成功后立即行3-MA（10mmol/L）的玻璃体腔注射。用苏木精伊红（HE）染色观察视网膜神经节细胞数量变化;免疫组织化学染色法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin1以及凋亡蛋白Caspase-3在各组大鼠视网膜中的AOD值,Western-blot检测自噬相关蛋白LC3和Beclin1、抗凋亡蛋白Bcl-2、凋亡蛋白Caspase-3在各组大鼠视网膜中的蛋白表达水平。结果:1.构建视网膜缺血再灌注的大鼠模型（1）HE染色结果显示:Sham组与NC组相比,两组视网膜神经节RGC细胞数量相比较无统计学差异（P>0.05）,IRI组中视网膜神经节（Retina ganglion cells,RGC）细胞数较NC组数量明显减少（P<0.01）;（2）Western blot结果显示:Sham组与NC组相比,LC3、Beclin1的表达无统计学差异（P>0.05）,IRI组相比于NC组LC3、Beclin1的表达量明显增加（P<0.05）2.探讨3-MA对大鼠视网膜缺血再灌注的作用与机制（1）HE结果染色:Sham组与NC组相比,两组RGC细胞数量相比较无统计学意义（P>0.05）,IRI组与3-MA+IRI组中RGC细胞数较NC组数量明显减少（P<0.01）;但3-MA+IRI组中RGC细胞数相较于IRI组有所增加（P<0.01）。（2）免疫组化学结果显示:Sham组与NC组相比,LC3、Beclin1、Caspase-3蛋白表达无明显差异（P>0.05）,IRI组和IRI+3-MA组与NC组相比,LC3、Bec lin1及Caspase-3的AOD值有明显增加（P<0.01）,而IRI+3-MA组与IRI组相比,LC3、Beclin1、Caspase-3的AOD值显着下降（P<0.01）,（3）Western blot结果显示:Sham组与NC组相比,LC3、Beclin1、Bcl-2以及Caspase-3蛋白表达无明显差异（P>0.05）,IRI组和IRI+3-MA组与NC组相比,LC3、Beclin1、Bcl-2及Caspase-3的蛋白表达量有明显增加（P<0.05）,而IRI+3-MA组与IRI组相比,LC3、Beclin1、Caspase-3蛋白表达量有所下降（P<0.05）,Bcl-2的蛋白表达量有所增加（P<0.05）。结论:1.大鼠视网膜缺血再灌注可以使视网膜神经节细胞凋亡2.大鼠视网膜缺血再灌注可以激活视网膜中的自噬相关通路并使视网膜中的自噬相关蛋白表达升高。3.3-MA可以降低视网膜缺血再灌注所引起的自噬相关蛋白的表达增高,对视网膜神经节细胞具有保护和抗凋亡的作用。
王好好[9]（2019）在《橙皮苷对缺氧/复氧大鼠视网膜的干预效应研究》文中提出目的:探讨缺氧/复氧对大鼠视网膜的影响以及橙皮苷的干预作用及可能机制研究。方法:将成年雄性SD大鼠（200-250g）126只,随机分成常氧对照组、缺氧组、缺氧/复氧24h组、缺氧/复氧48h组与缺氧+橙皮苷（Hesperidin;HDN）干预组、缺氧/复氧24h+HDN干预组、缺氧/复氧48h+HDN干预组各18只。常氧组大鼠在常氧环境（西宁,海拔2,260m）喂养,缺氧组及缺氧+HDN干预组、缺氧/复氧组及缺氧/复氧+HDN干预组放置氧舱喂养（模拟高原5,000m环境,低压氧舱）,其中缺氧组氧舱内正常喂养,缺氧干预组以及缺氧/复氧+HDN干预组给予HDN悬浊液（40mg/kg,每日一次）灌胃,缺氧及缺氧+HDN干预组7天后处死并取视网膜;缺氧/复氧及缺氧/复氧+HDN干预组7天出氧舱后放置常氧环境24h、48h后取大鼠眼球,并剥离完整视网膜,光镜下观察视网膜组织学变化,水溶性四唑盐（WST-1）法测定大鼠视网膜中超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase SOD）含量、硫代巴比妥酸（TBA）法测定丙二醛（Malondialdehyde MDA）含量、酶联免疫吸附测定法（Enzyme linked immunosorbent assay ELISA）测定NO的浓度、RT-PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）法检测脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor BDNF）mRNA表达。免疫组化检测caspase3、caspase9的表达。结果:缺氧/复氧组与正常组比较,视网膜细胞发生明显水肿,且视网膜中caspase3、caspase9阳性细胞表达增多,SOD活性降低,MDA活性升高,NO浓度升高,BDNFmRNA表达增加,差异有统计学意义（P<0.05）。缺氧/复氧24h组与缺氧组比较,复氧24h视网膜细胞水肿程度降低,且视网膜中caspase3、caspase9表达减少;SOD活性降低,差异有统计学意义（P<0.05）,MDA、NO、BDNF mRNA变化无统计学意义（P>0.05）;复氧48h水肿程度较复氧24h稍增强,且视网膜中caspase3、caspase9阳性细胞增多,缺氧/复氧48h时SOD活性升高,差异有统计学意义（P<0.05）。缺氧+HDN干预组,MDA含量降低,SOD活力升高,NO浓度降低,且差异有统计学意义（P<0.05）。缺氧/复氧24h+HDN干预组各基因变化均无统计学意义（P>0.05）。缺氧/复氧48h+HDN干预组视网膜细胞水肿程度较缺氧组减轻,视网膜中caspase3、caspase9阳性表达较缺氧组减弱,SOD活力升高,NO含量降低,升高BDNFmRNA表达差异有统计学意义（P<0.05）。结论:在缺氧/复氧环境下,大鼠视网膜发生组织学变化。缺氧/复氧可通过增加大鼠视网膜中MDA含量,降低SOD活力,升高NO浓度,抑制BDNFmRNA的表达,促进细胞凋亡,起到对视网膜损伤的作用。缺氧/复氧24h时,视网膜损伤减轻;复氧48h时,视网膜损伤程度稍有增强。橙皮苷可通过降低缺氧大鼠视网膜中MDA含量,升高SOD活力,降低NO浓度;增加缺氧/复氧48h组大鼠视网膜SOD活力,降低NO浓度、升高BDNFmRNA活力;抑制视网膜细胞凋亡,从而起到保护视网膜的作用。
秦亚丽[10]（2018）在《益气温阳通络法干预大鼠视网膜慢性低灌注损伤的疗效与机制研究》文中研究表明第一部分双侧颈总动脉结扎制备大鼠视网膜低灌注损伤模型目的:通过双侧颈总动脉结扎法建立大鼠视网膜慢性低灌注损伤模型,观察大鼠视网膜功能和形态学变化。方法:60只SD大鼠随机分为假手术组30只、模型组30只,模型组大鼠行双侧颈总动脉结扎术,假手术组大鼠仅分离出双侧颈总动脉但不结扎。分别在术后第7d、14d、28d采用眼底荧光血管造影（FFA）观察大鼠视网膜循环时间和血管形态,视网膜电流图（EGR）观察视网膜神经细胞的动作电位,激光散斑血流成像技术（PSI-NR）观察大鼠眼球表面血流灌注量变化。大鼠过量麻醉后处死,摘取眼球制备视网膜组织切片,通过HE染色观察大鼠视网膜形态结构变化。结果:与假手术组相比,模型组大鼠眼底动脉变细,静脉轻度扩张,14d时可见小血管瘤、出血,28d时可见血管节段性充盈和无灌注区;视网膜动脉充盈时间在14d、28d时出现明显延长（P<0.05）,静脉充盈时间在7d、14d和28d时均明显延长（P<0.01）。与假手术组相比,模型组大鼠在各时间点a、b波的潜伏期均明显延迟、振幅均明显降低（P<0.05）。随缺血时间的延长,模型组大鼠在各时间点的眼球表面血流灌注量持续下降（P<0.05）,28d时最严重。假手术组大鼠视网膜各层组织结构致密、排列整齐,细胞丰富、染色深;模型组大鼠视网膜各层结构疏松、排列紊乱,视网膜厚度明显变薄,神经节细胞层（RGCs）细胞数量明显减少,内核层、外核层萎缩,空泡样变性明显。结论:研究表明双侧颈总动脉结扎法可以成功诱导大鼠视网膜低灌注损伤,是一种比较理想的研究眼部慢性缺血的动物模型。第二部分观察益气温阳通络法对大鼠视网膜慢性低灌注损伤的功能和形态的保护作用目的:在双侧颈总动脉结扎法诱导实验性大鼠视网膜慢性低灌注损伤模型的基础上,观察益气温阳通络法（眼底3号）干预大鼠视网膜功能和形态学的变化。方法:40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、治疗组和对照组各10只,模型组、治疗组、对照组大鼠行双侧颈总动脉结扎术,假手术组大鼠仅分离出双侧颈总动脉但不结扎。术后给予治疗组大鼠眼底3号方（益气温阳通络法）水煎液灌胃（14.40g/Kg/d）,对照组给予前列地尔注射液腹腔注射（2.5ug/Kg/d）,假手术组和模型组大鼠分别给予同等体积的蒸馏水灌胃。实验周期为28d。采用FFA观察各组大鼠视网膜循环时间;采用EGR观察各组大鼠视网膜神经细胞的动作电位;采用PSI-NR观察各组大鼠眼球表面血流灌注量变化。大鼠过量麻醉后处死,摘取双侧眼球制备视网膜组织切片,通过光、电镜观察各组大鼠视网膜形态和超微结构变化。结果:（1）FFA:与模型组相比,治疗组、对照组动脉充盈时间未见明显差异（P>0.05）,静脉充盈时间明显缩短（P<0.01）。（2）ERG:与模型组相比,治疗组和对照组大鼠a波潜伏期缩短,a和b波振幅升高（P<0.05）。（3）PSI-NR:治疗组大鼠眼球表面血流灌注量较模型组和对照组均可见增加（P<0.05）。（4）HE:与模型组和对照组相比,治疗组大鼠视网膜各层结构相对整齐,RGCs数量相对丰富,视网膜全层和内、外核层的萎缩程度明显减轻（P<0.01）。（5）电镜:与假手术组相比,模型组大鼠视网膜神经节细胞丢失,核固缩明显,细胞器减少,可见大量增生活化的小胶质细胞,外核层细胞核大小不一,核膜皱缩、内陷,细胞外节疏松变形,并发生断裂、溶解;治疗组大鼠视网膜神经节细胞排列尚整齐,周围散在分布的小胶质细胞,外核层细胞较完整,染色质密切均匀,细胞外节排列整齐;对照组大鼠神经细胞损害情况较模型组略有改善。结论:益气温阳通络法（眼底3号）可能通过增加眼部血流灌注量、促进视网膜血液循环,以减轻BCCAO诱导的大鼠视网膜低灌注性损伤,进而保护视网膜神经细胞形态结构并提高神经细胞兴奋性。第三部分益气温阳通络法干预大鼠视网膜慢性低灌注损伤的机制研究目的:在建立实验性大鼠视网膜慢性低灌注损伤模型基础上,通过免疫组化和分子生物学技术,探讨益气温阳通络法干预视网膜低灌注损伤的疗效机制。方法:40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、治疗组和对照组各10只,模型组、治疗组、对照组大鼠行双侧颈总动脉结扎术,假手术组大鼠仅分离出双侧颈总动脉但不结扎。术后给予治疗组大鼠眼底3号方（益气温阳通络法）水煎液灌胃（14.40g/Kg/d）,对照组给予前列地尔注射液腹腔注射（2.5ug/Kg/d）,假手术组和模型组分别给予同等体积的蒸馏水灌胃。实验周期为28d。大鼠过量麻醉后处死,立刻摘取一侧眼球制备视网膜石蜡切片,应用免疫组织化学染色（Envision法）检测iNOS、NOX4、Bax、Bcl-2在视网膜的表达,经图像分析软件测量免疫组化的显色强度并进行定量分析;应用免疫荧光双标技术检测AQP4和GFAP的表达;摘取另一侧眼球在冰块上剥离视网膜,检测丙二醛（MDA）、过氧化物歧化酶（SOD）的含量变化;提取视网膜内蛋白,经蛋白质印迹（Western Blot）分析 iNOS、NOX4、Bax、Bcl-2、AQP4 和 GFAP 的表达量。结果:（1）MDA和SOD含量变化:与假手术组相比,模型组大鼠视网膜中SOD含量下降,MDA含量上升（P<0.01）;与模型组和对照组相比,治疗组SOD水平上升,MDA水平下降（P<0.05）。（2）免疫组化:①iNOS和NOX4表达:①与假手术组相比,模型组大鼠视网膜中iNOS和NOX4的阳性表达均明显升高（P<0.01）,与模型组相比,治疗组干预后视网膜中iNOS和NOX4表达减少（P<0.05）,阳性表达呈棕黄色或棕褐色颗粒。②Bax和Bcl-2表达:与假手术组相比,模型组大鼠视网膜中Bax阳性表达明显升高（P<0.01）,Bcl-2表达量明显降低（P<0.01）;与模型组相比,治疗组大鼠视网膜中Bax表达量降低（P<0.05）,Bcl-2表达量明显增加（P<0.01）。（3）免疫荧光:AQP4与GFAP共表达在Muller细胞上,模型组大鼠视网膜AQP4和GFAP阳性表达增加,表达在视网膜各层。治疗组大鼠视网膜AQP4和GFAP阳性表达减少。（4）Western-Blot:①iNOS和NOX4蛋白相对表达量:与假手术组对比,模型组大鼠视网膜iNOS和NOX4蛋白相对表达量明显增加（P<0.01）;与模型组对比,治疗组视网膜iNOS和NOX4蛋白相对表达量明显降低（P<0.01,P<0.05）。②Bax和Bcl-2蛋白相对表达量:与假手术组对比,模型组大鼠视网膜Bax蛋白相对表达量明显增加（P<0.01）,Bcl-2蛋白相对表达量明显减少（P<0.01）,与模型组对比,治疗组大鼠视网膜Bax蛋白相对表达量降低（P<0.05）,Bcl-2蛋白相对表达量明显升高（P<0.01）。③AQP4和GFAP蛋白相对表达量:假手术组大鼠视网膜中AQP4和GFAP蛋白少量表达,模型组大鼠视网膜AQP4和GFAP蛋白相对表达量明显升高（P<0.01）;治疗组与模型组相比,AQP4蛋白相对表达下降（P<0.01）,GFAP 未见明显差异（P>0.05）。结论:1.BCCAO诱导的大鼠视网膜慢性低灌注损伤,可能氧自由基损伤、细胞凋亡和胶质细胞活化增生等机制密切相关。2.益气温阳通络法（眼底3号方）可能通过调控抗氧化、抗凋亡、抑制胶质细胞增生等机制改善视网膜低灌注性损伤。
二、缺血再灌注损伤诱导大鼠视网膜细胞凋亡（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、缺血再灌注损伤诱导大鼠视网膜细胞凋亡（论文提纲范文）
（1）细胞外RNA/TLR3信号通路及RNase在视网膜缺血再灌注损伤中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 绪论 |
| 第一章 视网膜缺血再灌注损伤中TLR3表达的初步研究 |
| 前言 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 第二章 通过在体实验探讨TLR3信号通路在小鼠视网膜缺血再灌注损伤中的机制 |
| 前言 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 第三章 通过离体实验探讨TLR3信号通路在视网膜Muller细胞缺氧复氧损伤中的机制 |
| 前言 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 第四章 RNase/exRNAs在小鼠视网膜缺血再灌注损伤中的作用 |
| 前言 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 Toll样受体在视网膜缺血性疾病中的作用 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 缩略词中英文对照表 |
| 攻读学位期间成果 |
| 致谢 |
（2）原发性闭角型青光眼视神经缺血-再灌注损伤的临床研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 资料与方法 |
| 1.资料 |
| 2.方法 |
| 结果 |
| 1.一般情况 |
| 2.BCVA的变化 |
| 3.眼压变化 |
| 4.MOPP变化 |
| 5.眼压控制后RNFL厚度、GCC厚度及CT的变化 |
| 6.视野MD变化 |
| 7.视盘周围血管密度 |
| 8.黄斑区血管密度 |
| 9.相关性分析 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 视网膜缺血-再灌注损伤治疗的新靶点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（3）阿克苷通过miR-342-3p/OPTN分子轴及下游PI3K/AKT信号通路调控RGC-5细胞自噬和凋亡的作用机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 青光眼 |
| RGC细胞与青光眼 |
| RGC细胞凋亡 |
| 青光眼发生发展中RGC细胞的自噬异常 |
| 自噬与细胞凋亡的关系 |
| 自噬水平异常影响RGC细胞的存活和凋亡 |
| 白噬相关通路 |
| mTOR信号通路 |
| PI3K信号通路 |
| LC3信号通路 |
| 阿克苷在神经损伤或退行性疾病中对神经细胞具有保护作用 |
| OPTN与RGC细胞自噬、凋亡及青光眼的发生发展相关 |
| 本研究意义 |
| 第一部份阿克苷(Acteoside)对视网膜神经节细胞的保护作用 |
| 1.实验方法 |
| 1.1 实验资料与材料 |
| 1.2 细胞复苏 |
| 1.3 细胞传代与培养 |
| 1.4 CoCl_2诱导RGC-5细胞氧化应激损伤模型的建立 |
| 1.5 实验分组及处理 |
| 1.6 CCK-8实验测定各组RGC-5细胞的增殖活力 |
| 1.7 透射电镜观察RGC-5细胞自噬小体的水平 |
| 1.8 免疫荧光实验检测OPTN或自噬相关蛋白的表达 |
| 1.9 流式细胞仪检测各组RGC-5细胞凋亡 |
| 1.10 实验数据处理 |
| 2.结果 |
| 2.1 CoCl_2诱导RGC-5细胞氧化应激损伤模型的构建结果 |
| 2.2 CoCl_2损伤对RGC-5细胞增殖和凋亡的影响 |
| 2.3 CoCl_2损伤对RGC-5细胞损自噬水平和自噬相关蛋白的影响 |
| 2.4 阿克苷处理对损伤的RGC-5细胞增殖、自噬和凋亡的影响 |
| 3.讨论与小结 |
| 第二部份阿克苷对CoCl_2损伤的RGC-5细胞miRNA表达的影响 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 试剂与仪器 |
| 1.2 miRNA-seq检测RGC-5损伤与修复过程中异常表达的miRNA |
| 2 结果 |
| 2.1 芯片扫描结果 |
| 2.2 miRNAs在正常对照组、CoCl_2损伤组、阿克苷处理组RGC-5细胞中的表达差异情况 |
| 3.讨论与小结 |
| 第三部份阿克苷通过促进miR-342-3p对OPTN的负调控对损伤的RGC-5细胞的保护作用 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 实验试剂与仪器 |
| 1.2 实验分组及转染 |
| 1.3 OPTN重组质粒构建与敲降序列 |
| 1.4 CCK-8实验测定各组RGC-5细胞的增殖活力 |
| 1.5 qRT-PCR检测RGC-5细胞中miR-342-3p的表达 |
| 1.6 Western blotting检测RGC-5细胞中OPTN或细胞自噬相关蛋白的表达 |
| 1.7 免疫荧光实验检测OPTN或自噬相关蛋白的表达 |
| 1.8 双荧光素酶报告基因检测miR-342-3p与OPTN的靶向作用 |
| 1.9 透射电镜观察RGC-5细胞自噬小体的水平 |
| 1.10 流式细胞仪检测各组RGC-5细胞凋亡 |
| 1.11 实验数据处理 |
| 2.结果 |
| 2.1 OPTN重组质粒构建结果 |
| 2.2 阿克苷对RGC-5细胞miR-342-3p和OPTN表达的影响 |
| 2.3 敲降miR-342-3p显着降低阿克苷对损伤RGC-5细胞的保护作用 |
| 2.4 miR-342-3p与OPTN的靶向作用关系 |
| 2.5 阿克苷通过miR-342-3p/OPTN分子轴调控RGC-5细胞增殖、自噬及凋亡 |
| 3.讨论与小结 |
| 第四部份 阿克苷通过OPTN和PI3K/AKT信号通路调控RGC-5细胞增殖、自噬和凋亡的作用机制 |
| 1.实验方法 |
| 1.1 试剂与仪器 |
| 1.2 实验分组 |
| 1.3 细胞培养与转染 |
| 1.4 透射电镜观察自噬小体水平 |
| 1.5 Western blotting检测RGC-5细胞中OPTN或PI3K/AKT信号通路关键蛋白的表达 |
| 1.6 免疫荧光实验检测OPTN或PI3K/AKT信号通路及自噬相关蛋白的表达 |
| 1.7 检测Caspase3/7 |
| 1.8 实验结果的统计学处理 |
| 2.结果 |
| 2.1 阿克苷通过OPTN抑制自噬 |
| 2.2 阿克苷通过PI3K/AKT/mTOR通路抑制自噬 |
| 2.3 阿克苷与OPTN和PI3K/AKT/mTOR通路协同作用 |
| 2.4 阿克苷通过对自噬抑制的作用而降低RGC-5的凋亡水平 |
| 3.讨论与小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 视神经节细胞的凋亡及视神经保护的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（4）刺激迷走神经在急性高眼压模型诱导的视网膜缺血再灌注损伤中神经保护作用及机制研究（论文提纲范文）
| 论文创新点 |
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词 |
| 引言 |
| 第一部分 前房灌注急性高眼压引起的视网膜缺血再灌注损伤的模型特征 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 附图 |
| 第二部分 刺激迷走神经降低急性高眼压模型引起的视网膜功能损伤和缺血再灌注损伤 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表与学术论文相关科研成果 |
| 致谢 |
（5）活血通络利水方对RIR大鼠视网膜神经纤维层厚度及AQP4，GLAST，GS表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略表 |
| 引言 |
| 第1章 活血通络利水方对RIR大鼠视神经纤维层厚度的影响 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 实验动物、药物、仪器耗材以及实验试剂 |
| 1.1.2 大鼠视网膜缺血—再灌注损伤模型的制作 |
| 1.1.3 动物分组及给药方法 |
| 1.1.4 检测方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 大鼠视网膜缺血再灌注损伤后神经纤维层厚度随着时间变化的趋势 |
| 1.2.2 活血通络利水方对造模后BN大鼠视神经纤维层厚度的影响 |
| 第2章 活血通络利水方对RIR大鼠AQP4、GLAST、GS的分子蛋白表达的影响 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验动物、药物、仪器耗材以及实验试剂 |
| 2.1.2 大鼠视网膜缺血—再灌注损伤模型的制作与动物分组及实验方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 Westernblot检测造模后与造模服用通络利水方后AQP4、GLAST、GS的分子蛋白表达水平的变化 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 造模与阳性对照药的选择 |
| 2.3.2 活血通络利水方对视网膜神经纤维层的影响 |
| 2.3.3 活血通络利水方对AQP4 的影响 |
| 2.3.4 缺血、缺氧时GLAST与 GS的生理功能及活血通络利水方对其的影响 |
| 2.4 小结 |
| 参考文献 |
| 第3章 综述 视网膜缺血再灌注的分子机制与治疗 |
| 3.1 视网膜缺血再灌注损伤 |
| 3.1.1 视网膜缺血再灌注损伤的概念 |
| 3.1.2 视网膜缺血再灌注中谷氨酸浓度变化及兴奋毒性 |
| 3.1.3 Müller细胞与谷氨酸 |
| 3.1.4 水通道蛋白(AQP4)与谷氨酸的关系 |
| 3.1.5 视网膜水肿 |
| 3.1.6 视网膜缺血再灌注损伤时与神经纤维层厚度的关系 |
| 3.2 视网膜缺血再灌注损伤的中西医治疗 |
| 3.2.1 视网膜缺血再灌注损伤机制 |
| 3.2.2 西医的治疗 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 导师简介 |
| 作者简介 |
| 学位论文数据集 |
（6）枸杞多糖对大鼠缺血再灌注视网膜保护作用的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第1章 引言 |
| 1.1 概述 |
| 1.2 病理机制 |
| 1.3 枸杞多糖 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 材料及试剂 |
| 2.1.1 主要药品及试剂 |
| 2.1.2 主要实验仪器及设备 |
| 2.1.3 主要试剂的配制 |
| 2.1.4 实验动物 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验分组 |
| 2.2.2 建立SD大鼠视网膜缺血再灌注模型 |
| 2.2.3 视网膜缺血和血液供应恢复的测定 |
| 2.2.4 实验动物纳入和排除标准 |
| 2.2.5 实验取材 |
| 2.2.6 石蜡包埋 |
| 2.2.7 HE染色 |
| 2.2.8 免疫组化 |
| 2.2.9 观察方法 |
| 2.2.10 统计学方法 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 光镜下HE染色视网膜组织学观察 |
| 3.1.1 假手术组 |
| 3.1.2 模型组和药物组 |
| 3.1.3 模型组与药物组相比较 |
| 3.2 免疫组化 |
| 3.2.1 凋亡基因Caspase-3 蛋白表达的变化 |
| 3.2.2 凋亡基因Bcl-2 蛋白表达的变化 |
| 3.2.3 凋亡基因Bax蛋白表达的变化 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 视网膜缺血再灌注模型的建立 |
| 4.2 枸杞多糖的药理作用 |
| 4.3 视网膜缺血再灌注损伤机制 |
| 4.4 细胞凋亡及其相关蛋白基因与视网膜缺血再灌注损伤 |
| 4.5 枸杞多糖与视网膜疾病 |
| 第5章 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（7）NBP对H2O2诱导的视网膜氧化应激及细胞凋亡抑制作用的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、NBP通过抑制氧化应激对大鼠视网膜的保护机制研究 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验耗材 |
| 1.1.3 实验设备 |
| 1.1.4 试剂配制与实验准备 |
| 1.1.5 实验动物模型的建立 |
| 1.1.5.1 实验分组 |
| 1.1.5.2 分组干预 |
| 1.1.5.3 实验造模 |
| 1.1.5.4 模型建立完成 |
| 1.1.5.5 实验动物处死 |
| 1.1.5.6 实验动物模型取材 |
| 1.1.6 样本制备 |
| 1.1.6.1 石蜡包埋 |
| 1.1.6.2 样本切片 |
| 1.1.6.3 切片HE染色 |
| 1.1.6.4 免疫荧光 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 实验动物HE染色结果 |
| 1.2.2 免疫荧光-Nrf2 染色 |
| 1.2.3 免疫荧光-HO-1 染色 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、NBP通过抑制氧化应激对Müller细胞的保护机制研究 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 研究细胞 |
| 2.1.2 实验试剂、耗材 |
| 2.1.3 实验器材与设备 |
| 2.1.4 细胞模型的建立 |
| 2.1.4.1 试剂配制与实验准备 |
| 2.1.4.2 细胞来源 |
| 2.1.4.3 细胞鉴定 |
| 2.1.4.4 摸索氧化应激刺激浓度 |
| 2.1.4.5 检测丁基苯酞(NBP)浓度梯度对细胞的影响力 |
| 2.1.4.6 Müller细胞HE染色 |
| 2.1.4.7 Müller细胞Live&Dead细胞染色 |
| 2.1.4.8 Müller细胞Hoechst33258染色 |
| 2.1.4.9 Müller细胞JC-1 染色 |
| 2.1.4.10 Müller细胞蛋白质免疫印迹(Western blotting) |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1Müller细胞荧光染色鉴定 |
| 2.2.2 过氧化氢浓度摸索 |
| 2.2.3 丁基苯酞用药浓度摸索 |
| 2.2.4 Müller细胞 24h HE染色图 |
| 2.2.5 Müller细胞 48h HE染色图 |
| 2.2.6 Müller细胞 72h HE染色图 |
| 2.2.7 Müller细胞死活细胞染色 |
| 2.2.8 Müller细胞Hoechst33258染色 |
| 2.2.9 Müller细胞JC-1 染色 |
| 2.2.10 Müller细胞ROS+ER染色 |
| 2.2.11 Müller细胞免疫荧光Nrf2染色 |
| 2.2.12 Western Blotting检测NBP刺激下Nrf2的蛋白表达量 |
| 2.2.13 Western Blotting检测Nrf2核转位 |
| 2.2.14 Müller细胞免疫荧光HO-1 染色 |
| 2.2.15 Western Blotting检测NBP刺激下HO-1 的蛋白表达量 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 缺血再灌注损伤与眼科疾病的研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）探索自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤在视网膜缺血损伤后的保护作用和机制（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分:构建视网膜缺血再灌注的大鼠模型 |
| 一 实验仪器及试剂 |
| 二 实验方法 |
| 三 实验结果 |
| 四 讨论 |
| 第二部分:探索3-甲基腺嘌呤在视网膜缺血再灌注中的作用 |
| 一 仪器及设备 |
| 二 实验方法 |
| 三 实验结果 |
| 四 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（9）橙皮苷对缺氧/复氧大鼠视网膜的干预效应研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要符号对照表 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 动物及饲料 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 分组、造模及干预 |
| 2.2.2 视网膜采集与保存 |
| 2.2.3 视网膜匀浆液的准备 |
| 2.2.4 HE染色 |
| 2.2.5 免疫组织化学染色法检测 |
| 2.2.6 BCA法蛋白测定 |
| 2.2.7 SOD测定 |
| 2.2.8 MDA测定 |
| 2.2.9 NO的测定 |
| 2.2.10 BDNFm RNA表达的测定 |
| 2.3 统计方法 |
| 2.4 技术路线图 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 缺氧/复氧对大鼠视网膜的影响 |
| 3.1.1 各组视网膜HE染色结果 |
| 3.1.2 各组视网膜免疫组化结果 |
| 3.1.3 各组视网膜SOD、MDA、NO、BDNFmRNA表达结果 |
| 3.2 HDN对缺氧/复氧大鼠视网膜的影响 |
| 3.2.1 各组视网膜HE染色结果 |
| 3.2.2 各组视网膜免疫组化结果 |
| 3.2.3 各组视网膜SOD、MDA、NO、BDNFmRNA表达结果 |
| 3.2.3.1 缺氧组大鼠视网膜各基因变化 |
| 3.2.3.2 缺氧/复氧24h组大鼠视网膜各基因变化 |
| 3.2.3.3 缺氧/复氧48h组大鼠视网膜各基因变化 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 缺氧/复氧环境的建立 |
| 4.2 缺氧/复氧以及相关基因研究 |
| 4.3 橙皮苷的药理作用 |
| 4.4 实验结果分析 |
| 4.4.1 缺氧/复氧对大鼠视网膜的影响 |
| 4.4.2 HDN对缺氧/复氧大鼠视网膜的干预作用 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（10）益气温阳通络法干预大鼠视网膜慢性低灌注损伤的疗效与机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩写词 |
| 文献综述 |
| 综述一 颈源性眼缺血综合征的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 视网膜缺血的动物模型概述 |
| 参考文献 |
| 综述三 视网膜低灌注性损伤发病机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一部分 双侧颈总动脉结扎制备大鼠视网膜低灌注损伤模型 |
| 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 仪器设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组与模型制备 |
| 2.2 鼠尾-视网膜循环时间 |
| 2.3 视网膜电流图 |
| 2.4 眼球表面血流灌注量检测 |
| 2.5 视网膜光镜观察 |
| 2.6 统计学处理 |
| 结果 |
| 1 鼠尾-视网膜循环时间变化 |
| 2 ERG潜伏期和振幅变化 |
| 3 眼表血流灌注量变化 |
| 4 视网膜形态学结构变化 |
| 讨论 |
| 1 模型选择 |
| 2 低灌注损伤后视网膜功能和形态变化 |
| 结论 |
| 第二部分 观察益气温阳通络法对大鼠视网膜慢性低灌注损伤的功能和形态的保护作用 |
| 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验用药与试剂 |
| 1.3 仪器设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组与模型制备 |
| 2.2 干预给药 |
| 2.3 鼠尾-视网膜循环时间 |
| 2.4 视网膜电流图 |
| 2.5 眼球表面血流灌注量 |
| 2.6 视网膜光镜观察与厚度测量 |
| 2.7 视网膜透射电镜观察 |
| 2.8 统计学处理 |
| 结果 |
| 1 鼠尾-视网膜循环时间变化 |
| 2 ERG潜伏期和振幅变化 |
| 3 眼表血流灌注量变化 |
| 4 视网膜形态学结构变化 |
| 5 视网膜超微结构变化 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第三部分 益气温阳通络法干预大鼠视网膜慢性低灌注损伤的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验用药与试剂 |
| 1.3 仪器设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组与模型制备 |
| 2.2 干预给药 |
| 2.3 视网膜中SOD和MDA水平检测 |
| 2.4 免疫组织化学法检测iNOS、NOX4、Bax和Bcl-2在大鼠视网膜表达情况 |
| 2.5 免疫荧光染色检测AQP4、GFAP共表达情况 |
| 2.6 Western Blot分析iNOS、NOX4、Bax、Bcl-2、AQP4和GFAP的表达量 |
| 2.7 统计学处理 |
| 结果 |
| 1 各组大鼠视网膜SOD和MDA含量变化 |
| 2 各组大鼠视网膜免疫组织化学法检测阳性表达结果 |
| 2.1 各组大鼠视网膜中iNOS和NOX4表达情况 |
| 2.2 各组大鼠视网膜中Bax和Bcl-2表达情况 |
| 3 免疫荧光检测AQP4和GFAP表达情况 |
| 4 Western-Blot检测蛋白阳性表达结果 |
| 4.1 大鼠视网膜iNOS和NOX4蛋白定量结果 |
| 4.2 大鼠视网膜Bax和Bcl-2蛋白定量结果 |
| 4.3 大鼠视网膜AQP4和GFAP蛋白定量结果 |
| 讨论 |
| 1 视网膜低灌注性损伤机制探讨 |
| 1.1 氧自由基损伤 |
| 1.2 Bcl-2/Bax相互拮抗作用 |
| 1.3 胶质细胞增生活化 |
| 2 眼底3号方疗效机制探讨 |
| 2.1 中医认识 |
| 2.2 抗氧化机制 |
| 2.3 抗凋亡和抗胶质细胞增生机制 |
| 结论 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
四、缺血再灌注损伤诱导大鼠视网膜细胞凋亡（论文参考文献）
- [1]细胞外RNA/TLR3信号通路及RNase在视网膜缺血再灌注损伤中的作用及机制研究[D]. 韩昀. 南方医科大学, 2021(02)
- [2]原发性闭角型青光眼视神经缺血-再灌注损伤的临床研究[D]. 龙河. 大连医科大学, 2020(03)
- [3]阿克苷通过miR-342-3p/OPTN分子轴及下游PI3K/AKT信号通路调控RGC-5细胞自噬和凋亡的作用机制研究[D]. 陈前波. 昆明医科大学, 2019(02)
- [4]刺激迷走神经在急性高眼压模型诱导的视网膜缺血再灌注损伤中神经保护作用及机制研究[D]. 江梦南. 武汉大学, 2019(01)
- [5]活血通络利水方对RIR大鼠视网膜神经纤维层厚度及AQP4，GLAST，GS表达的影响[D]. 田根全. 华北理工大学, 2019(01)
- [6]枸杞多糖对大鼠缺血再灌注视网膜保护作用的实验研究[D]. 曹玲英. 南昌大学, 2019(01)
- [7]NBP对H2O2诱导的视网膜氧化应激及细胞凋亡抑制作用的研究[D]. 黄亮瑜. 天津医科大学, 2019(02)
- [8]探索自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤在视网膜缺血损伤后的保护作用和机制[D]. 汪霄瑞. 福建医科大学, 2019(07)
- [9]橙皮苷对缺氧/复氧大鼠视网膜的干预效应研究[D]. 王好好. 青海大学, 2019(04)
- [10]益气温阳通络法干预大鼠视网膜慢性低灌注损伤的疗效与机制研究[D]. 秦亚丽. 北京中医药大学, 2018(04)