一、咖啡因对LY294002诱导的小脑颗粒神经元凋亡的拮抗作用(英文)（论文文献综述）
高慧[1]（2020）在《Fto介导的脂质微环境通过调节腺苷代谢调控成体神经发生》文中进行了进一步梳理目的:Fto蛋白作为脂肪发生过程中一个关键的分子,对脂肪组织的发育和脂肪细胞的形成具有关键的作用,但Fto条件缺乏是否会影响海马区的脂质代谢是未知的,我们对此进行探究。成体神经发生是指成年动物体内的神经干细胞,分化为神经元并迁移整合到神经环路的过程。文献提示脂质代谢参与海马区成体神经发生调控。探究Fto条件敲除对海马区成体神经发生及海马区学习记忆功能的影响。探究Fto缺失导致的成体神经干细胞神经发生受损是否是细胞凋亡增加造成,以及Fto缺失造成成体神经干细胞凋亡增加的具体机制。方法:利用油红O染色和western blot的实验方法,检测野生型不同发育阶段小鼠海马组织中的脂质含量变化;构建脂肪组织特异性敲除Fto的小鼠,利用油红O染色和western blot的实验方法,检测成年Ctrl和Fto cKO小鼠海马区脂质含量变化。利用体内Brd U标记实验进行体内成体神经干细胞增殖和分化的检测;通过小鼠水迷宫实验检测小鼠的学习记忆能力。体内对成年Fto cKO和Ctrl小鼠脑片进行TUNEL染色;体外将Fto cKO和Ctrl小鼠原代脂肪细胞分离,与野生型神经干细胞建立共培养体系,而后进行active caspase-3和TUNEL染色。我们进行了FtocKO和Ctrl小鼠海马组织的转录组学测序和原代培养脂肪细胞的培养基质谱,找到脂肪中Fto蛋白调控神经干细胞的中间分子。采用腺苷体内实验定量检测成年Fto cKO和Ctrl小鼠海马区腺苷含量。采用腺苷处理体外培养成体神经干细胞,检测凋亡变化。结果:油红O染色和western blot实验显示野生型小鼠海马区脂质含量从幼年到成年的发育过程中不断增加;Fto cKO的成年小鼠海马区脂质减少。体内Brd U标记实验证明Fto条件敲除不影响海马区成体神经干细胞的增殖,但是会造成神经干细胞分化产生的未成熟神经元和成熟神经元减少;小鼠水迷宫实验显示cKO小鼠训练阶段找到平台花费的时间更长,测试阶段穿过平台的次数少,平台象箱停留的时间短,首次进入平台花费的时间长,但游泳速度和距离不变化。体内的海马区TUNEL染色显示Fto条件敲除造成成体神经干细胞凋亡增加;体外的active caspase-3和TUNEL染色提示Fto条件敲除造成分化状态成体神经干细胞凋亡增加,不影响增殖状态神经干细胞凋亡。海马转录组水平测序提示Fto cKO小鼠海马区脂质代谢异常;质谱结果显示Fto cKO组培养基中腺苷含量增加;体内腺苷定量实验显示Fto cKO组小鼠海马区腺苷含量升高;体外成体神经干细胞腺苷处理实验说明腺苷处理可以促进分化状态神经干细胞的凋亡,不影响增殖状态神经干细胞凋亡。结论:小鼠出生后从幼年到成年的发育过程中,海马区的脂质不断累积;Fto条件敲除造成成年小鼠海马区脂质代谢异常;Fto cKO小鼠的海马区成体神经发生受损;Fto cKO小鼠学习记忆能力降低。体内和体外实验都显示Fto条件敲除造成分化状态成体神经干细胞凋亡增加。Fto敲除造成脂质微环境异常,造成腺苷含量增加引起神经干细胞凋亡,使得分化的未成熟和成熟神经元数量减少,参与神经发生调控。
陈书清[2]（2018）在《苦茶碱的分离制备以及对谷氨酸诱导的HT22细胞损伤的保护作用》文中认为谷氨酸（Glutamate,Glu）是中枢神经系统内含量最高、作用最广泛的兴奋性氨基酸。当大脑出现缺血缺氧损伤时,细胞外Glu浓度会过高,并会和Glu受体过度结合,导致神经元死亡。苦茶碱（Theacrine,TC）是主要存在于苦茶中的嘌呤生物碱,具有镇静催眠、抗抑郁和消炎镇痛等生理功效。本文研究了运用制备色谱法分离制备苦茶中的TC的方法,以HT22细胞为研究对象,建立了Glu诱导损伤的细胞模型,探讨了TC对Glu诱导HT22细胞损伤的保护作用以及可能机制。具体研究结果如下:（1）以制备TC的纯度、回收率、保留时间和分离度为考察指标,研究了不同的流动相比例、上样浓度、上样体积以及流动相流速对分离制备过程的影响。TC的最佳制备色谱程序为:B相35%平衡1BV（一个柱体积）,手动进样,1.01-1.50BV B相35%,1.51-3.30BV B相45%,上样浓度为10mg/ml,上样体积为500μl,流速为2ml/min。分离得到的物质经过UPLC-MS/MS鉴定,确定为TC。（2）以HT22细胞为研究对象,5mmol/L的Glu建立细胞损伤模型,发现TC和A2A受体拮抗剂SCH58261对Glu诱导的HT22细胞损伤具有保护作用,能够明显改善细胞形态,提高细胞存活率,并且具有一定的浓度依赖性。（3）Glu诱导HT22细胞能够使SOD活力下降,MDA含量上升,TC能够显着性提高Glu诱导HT22细胞的SOD活力,显着性降低MDA含量,并表现出一定的浓度依赖性。（4）通过观察Hoechst 33342染色后HT22细胞的形态以及流式Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,发现Glu诱导可以使HT22细胞产生明显的凋亡形态,细胞凋亡率明显增加,而加入TC后可以明显改善Glu诱导的HT22细胞的凋亡形态、降低细胞凋亡率,并表现出一定的浓度依赖性。综上所述,制备色谱能够有效分离制备苦茶中的TC,并且TC能够抑制Glu诱导的HT22细胞损伤,其作用机制为:TC的保护作用可能与抗氧化和抗凋亡有关,也可能与TC作为A2A受体拮抗剂有关。
吴殿秀[3]（2013）在《丙戊酸对大鼠臂丛神经根性撕脱伤后脊髓运动神经元保护作用及其分子机制研究》文中认为目的意义臂丛神经根性撕脱伤是最严重、最难修复的一种周围神经损伤。由于其病情复杂、诊断困难及并发症严重，不仅给患者带来机体和心理的双重残疾，亦给其家庭及社会带来沉重负担。随着显微外科技术的发展，神经吻合、神经移位等手术方法已广泛应用于神经根性撕脱伤的临床治疗，但由于撕脱伤后脊髓运动神经元出现大量死亡，神经再生缺乏“原动力”，导致术后肢体功能的恢复十分困难。丙戊酸作为抗癫痫、情绪稳定剂是神经科疾病治疗的常用药物。新近研究表明，丙戊酸尚可促进体外培养的神经细胞存活及再生，但对于其体内神经保护作用及相关机制，尤其是对臂丛神经根性撕脱伤后运动神经元的保护作用还知之甚少。本研究通过建立全臂丛神经根性撕脱伤的动物模型，应用Western blot、实时荧光定量PCR、免疫组化、尼氏体染色和TUNEL等检测技术，探讨丙戊酸对臂丛神经根性撕脱伤后运动神经元的保护作用及其分子机制，为丙戊酸早日应用于临床促进周围神经损伤后肢体功能恢复提供理论基础。材料方法成年Wistar雄性大鼠288只，随机等分为假手术组（麻醉后显露臂丛神经后直接闭合创口）、单纯损伤组（臂丛神经根性撕脱伤）和丙戊酸组（臂丛神经根性撕脱伤+每日丙戊酸300mg/kg）。三组大鼠分别在伤后1、2、3、7、14和28天固定时间内处死并留取脊髓C5-T1段。尼氏体染色法观察脊髓运动神经元存活数；TUNEL法检测运动神经元凋亡数；透射电镜观察运动神经元及胶质细胞的超微结构；免疫组化法检测c-Jun和Bcl-2在脊髓运动神经元内的表达情况及阳性细胞数；Western blot法和实时定量荧光PCR分别检测c-Jun和Bcl-2的蛋白及mRNA表达水平。研究结果1．脊髓存活运动神经元计数：单纯损伤组和丙戊酸组伤后1至7天神经元数量均无明显变化，14天和28天数量急剧减少。两组比较，丙戊酸组神经元存活数量较多，在第14天（p<0.05）和28天（p<0.01）差异具有统计学意义。2．脊髓运动神经元凋亡细胞计数：单纯损伤组和丙戊酸组伤后第1天无阳性表达，第2至28天均可见凋亡细胞。两组比较，丙戊酸组神经元凋亡数量明显减少，在第3天（p<0.01）和7天（p<0.01）差异具有统计学意义。3．脊髓运动神经元及胶质细胞超微结构观察：单纯损伤组和丙戊酸组伤后均可见神经毡内部分空化，轴突溶解。单纯损伤组运动神经元可见核切迹、核固缩等细胞损伤和死亡现象；而丙戊酸组胞质内可见粗面内质网和线粒体增多。单纯损伤组神经胶质细胞可见核肥大、边聚，部分细胞空化坏死；而丙戊酸组的胞质内可见大量粗面内质网及核糖体，细胞空化不明显。4．脊髓运动神经元c-Jun蛋白表达变化：①c-Jun蛋白主要分布于运动神经元细胞核内。②单纯损伤组和丙戊酸组伤后c-Jun表达的阳性神经元百分比和蛋白量明显增高：c-Jun蛋白于第1天反应性升高，第3天达峰值，之后逐渐降低。两组比较，丙戊酸组c-Jun表达的阳性细胞数较少，伤后第1天（p<0.05）、2天（p<0.01）、3天（p<0.05）、7天（p<0.05）差异具有统计学意义；丙戊酸组c-Jun蛋白表达量减少，伤后第1天（p<0.05）、2天（p<0.05）、3天（p<0.01）、7天（p<0.05）差异具有统计学意义。③单纯损伤组和丙戊酸组伤后c-Jun mRNA表达均上调，于第1天反应性升高，第3天达峰值。两组比较，丙戊酸组表达水平较低，伤后第1天（p<0.05）、2天（p<0.05）、3天（p<0.01）、7天（p<0.05）有统计学差异。5．脊髓运动神经元Bcl-2蛋白表达变化：①Bcl-2蛋白主要分布于运动神经元细胞浆内；②单纯损伤组和丙戊酸组伤后Bcl-2表达的阳性神经元百分比和蛋白量亦明显升高：Bcl-2蛋白于第1天升高，第7天达峰值，后逐渐回落。两组比较，丙戊酸组Bcl-2表达的阳性细胞数较多，伤后第1天（p<0.05）、2天（p<0.01）、3天（p<0.01）、7天（p<0.01）和14天（p<0.05）差异具有统计学意义；丙戊酸组Bcl-2蛋白表达量增多，伤后第2天（p<0.01）、3天（p<0.05）、7天（p<0.05）差异具有统计学意义。③单纯损伤组和丙戊酸组伤后Bcl-2蛋白的mRNA表达均上调，于第1天反应性升高，第7天达峰值。两组比较，丙戊酸组表达水平明显增高，伤后第2天（p<0.05）、3天（p<0.05）、7天（p<0.05）具有统计学差异。研究结论1．改良全臂丛神经根性撕脱伤动物模型的神经根性撕脱确切、副损伤小、模型稳定、符合创伤实际机制；2．全臂丛神经根性撕脱伤可导致脊髓相应节段内运动神经元大量死亡，应用丙戊酸可减少神经元凋亡、增加神经元存活数量，发挥其保护神经的作用；3．全臂丛神经根性撕脱伤后可引起脊髓相应节段运动神经元c-Jun蛋白与Bcl-2蛋白表达上调，而应用丙戊酸则可抑制神经元的c-Jun蛋白表达、增加Bcl-2蛋白表达。丙戊酸通过下调c-Jun蛋白、上调Bcl-2蛋白表达抑制神经细胞凋亡、增加细胞存活数量，可能是其神经保护作用的重要机制之一。
汪超军[4]（2012）在《咖啡因对p53野生型RT4膀胱癌细胞DNA损伤反应影响的机理研究》文中进行了进一步梳理研究背景：膀胱癌是人类的多发病和常见病,全世界范围内膀胱癌发病率有逐年增加的趋势。流行病学的研究提示膀胱癌的发生受到很多环境因素的影响,其中就包括通过饮用咖啡等途径对咖啡因的摄入,过量摄入咖啡因可增加发生膀胱癌的危险性。但咖啡因又是世界范围内消耗最大、应用最广泛的一种神经刺激物,由于人口基数很大,如果咖啡因确实能引起膀胱癌的发生和发展,那么对整个人群健康就会产生重大的影响。因此,对咖啡因与膀胱癌之间究竟是何关系及可能的影响机制进行深入的研究就显得十分的必要。第一部分研究咖啡因（caffeine）对p53野生型RT4膀胱癌细胞凋亡的影响研究目的：应用MTT及流式细胞技术,观察咖啡因（caffeine）、离子射线（IR）和两者联合应用对p53野生型RT4膀胱癌细胞产生的反应,以了解咖啡因对膀胱癌细胞凋亡的影响。材料和方法：1.RT4膀胱癌细胞的培养。2.细胞分组及处理。3.单纯IR对RT4膀胱癌细胞增殖活性的影响（MTT法）。4.IR联合咖啡因对RT4膀胱癌细胞增殖活性的影响（MTT法）。5.流式细胞技术检测细胞的凋亡6.统计学分析。结果：1.IR促进了体外培养的RT4膀胱癌细胞株的凋亡。2.咖啡因能降低IR对RT4膀胱癌细胞的杀伤作用。结论：1.IR照射RT4膀胱癌细胞后,细胞呈现凋亡,并具有时间和剂量依赖模式。2.IR和咖啡因共同处理后,细胞呈现凋亡,也并具有时间和剂量依赖模式。3.加入浓度为1mM的咖啡因后,受不同放射剂量作用的RT4膀胱癌细胞的凋亡数量均有明显的下降,表明1mM浓度的咖啡因对RT4膀胱癌细胞株有放射保护作用。第二部研究咖啡因（caffeine）对p53野生型RT4膀胱癌细胞周期的影响研究目的：通过对咖啡因（caffeine）、离子射线（IR）和两者联合处理过的p53野生型RT4膀胱癌细胞进行细胞周期检测,以了解咖啡因对p53（+）的RT4膀胱癌细胞周期的影响。材料和方法：流式细胞技术检测各个细胞周期的细胞结果：1.IR照射可引起GO/G1和G2/M细胞期的阻滞,其中以G2/M期阻滞更加明显。2.1mM咖啡因也可引起细胞周期G0/G1和G2/M的阻滞,也对G2/M的阻滞更加明显3.咖啡因降低了IR对膀胱癌RT4细胞周期阻滞的影响,使细胞快速通过GO/G1,却在G2/M期的阻滞增加结论：RT4膀胱癌细胞受照射后发生GO/G1和G2/M细胞周期阻滞的出现和消退与放射敏感性可能有一定的关系,咖啡因通过增加RT4细胞在G2/M期的阻滞,降低了RT4细胞的凋亡,呈现出放射保护作用。第三部分探讨咖啡因（caffeine）影响p53野生型RT4膀胱癌细胞的DNA损伤反应机制研究目的：检测经咖啡因（caffeine）、离子射线（IR）和两者联合处理过的p53野生型RT4膀胱癌细胞的yH2AX, ATM, ATR, pATM, Chkl, Chk2, p-Chk2, p53, p-p53, p21, PUMA, FAS等一系列DNA损伤反应物质,来探讨咖啡因对RT4膀胱癌细胞影响的可能机制。材料和方法：1.免疫荧光法检测yH2AX foci的数量和密度。2.Real time PCR检测p53及其靶基因的表达。3.Western blotting检测p53, p-p53, ATM, p-ATM, ATR, Chk2, p-Chk2, γH2AX, PUMA,p21和Caspase-3等的表达。结果：1.咖啡因通过抑制上游调节物来抑制γH2AX。2.咖啡因抑制了p53以及其靶基因的表达。3.咖啡因降低了IR对RT4膀胱癌细胞的凋亡。结论：1.IR可能通过ATM-Chk2-p53-Puma信号轴对RT4细胞起到杀伤作用。2.咖啡因通过抑制ATM和ATR等DNA损伤-反应网络等上游调节物来抑制γH2AX的表达。3.咖啡因抑制了TP53, p21, PUMA, FAS等p53下游靶基因的表达。4.啡因可能通过抑制RT4膀胱癌细胞的DNA损伤反应信号通路来降低IR对它的杀伤作用,咖啡因对RT4膀胱癌细胞起到了放射保护的作用。第四部分咖啡因（caffeine）对RT4膀胱癌在裸鼠体内影响的研究研究目的：利用体外培养的RT4膀胱癌细胞株接种裸鼠,制造出荷瘤的裸鼠动物模型,然后用离子射线（IR）来照射用咖啡因处理过的实体瘤,来验证咖啡因是否会增加RT4膀胱癌细胞的放射敏感性及其可能的机制。材料和方法：1.RT4膀胱癌细胞的培养。2.RT4膀胱癌细胞的复苏和冻存。3.建立RT4膀胱癌细胞株的裸鼠模型。4.实验分组及处理。5.免疫组化分析检测γH2AX和p-ATM的表达。结果：1.RT4膀胱癌细胞株荷瘤裸鼠动物模型的成功建立。2.咖啡因降低了正常裸鼠膀胱粘膜细胞在IR后的凋亡。3.咖啡因降低RT4膀胱癌细胞对IR的敏感性,减少了IR后γH2AX形成。4.咖啡因降低了IR对RT4膀胱癌细胞的影响,降低了IR后pATM的表达。结论：1.用培养的RT4膀胱癌细胞株能建立良好的荷瘤裸鼠动物模型。2.1mM浓度的咖啡因能降低IR引起的膀胱癌细胞株实体瘤的凋亡。3.1mM浓度咖啡因可能通过抑制了ATM-Chk2-P53-Puma的途径以及激活了其他DNA损伤反应途径而获得了对P53（+）的RT4膀胱癌细胞的保护作用
李鸿梅[5]（2011）在《嘌呤核苷酸补偿对海洛因依赖大鼠 5-羟色胺神经系统的生物学效应研究》文中研究指明阿片类药物滥用和成瘾是严重的、长期未解决的而且是急需解决的医学和社会问题。药物成瘾是一种以强迫性用药为主要特征的慢性复发性脑病。对海洛因成瘾的动物模型及临床海洛因滥用者的研究发现,海洛因可使脑内单胺类神经递质5-羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）含量下降,5-HT水平下降与抑郁和强迫行为有关,而这两种疾病与成瘾行为密切相关,在成瘾行为中发挥重要作用,因此,滥用海洛因所导致的5-HT水平下降,是出现躯体依赖症状和精神依赖症状的主要原因。色氨酸羟化酶（tryptophan hydroxylase,TPH）是5-HT能神经元内催化5-HT生物合成的第一个酶,也是5-HT合成的限速酶。因此,TPH能影响5-HT神经传递的效率,能改变TPH活性和/或改变TPH基因表达的药物,都可以对5-HT系统产生长期的效应。正是由于这个原因,TPH基因很可能是5-HT能神经元功能调节通路中的作用靶标。本课题在以往的研究基础上,首先建立海洛因依赖、戒断、海洛因依赖同时补偿AMP、GMP和AMP+GMP的大鼠模型,以大鼠的脑组织为研究对象,测定了脑组织中5-HT及其代谢产物5-羟吲哚乙酸（5-hydroxyindoleacetic acid,5-HIAA）的含量,检测了TPH在蛋白质水平及基因水平表达的变化,检测了脑组织中嘌呤核苷酸的含量及GTP环水解酶Ⅰ（GTP cyclohydrolaseⅠ, GTPCH）基因表达的变化,观察了大鼠脑组织超微结构的改变,检测了大鼠脑组织中胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein, GFAP）及凋亡蛋白酶caspase-3表达的变化。本实验在动物整体水平的研究基础之上,建立细胞水平的实验模型,以体外培养的大鼠C6神经胶质瘤细胞为研究对象,研究海洛因及AMP、GMP和AMP+GMP对C6神经胶质瘤细胞的增殖及细胞中凋亡蛋白酶caspase-3表达的影响,进一步探讨海洛因的毒性作用及嘌呤核苷酸对海洛因毒性作用的拮抗效应。实验结果如下：1.给海洛因的同时补偿嘌呤核苷酸,减轻了大鼠的咀嚼、齿颤和上睑下垂急性戒断症状。2.海洛因使大鼠脑组织中5-HT及其代谢产物5-HIAA的含量下降,补偿嘌呤核苷酸可以减轻海洛因对5-HT及5-HIAA含量产生的影响。3.海洛因使大鼠脑组织中TPH基因在蛋白质水平和转录水平的表达都有所下降,补偿嘌呤核苷酸可抑制海洛因对TPH基因表达产生的这种抑制效应。4.海洛因使大鼠脑组织中嘌呤核苷酸AMP、GMP和GTP含量下降,补偿嘌呤核苷酸使脑组织中AMP和GTP含量升高;海洛因使大鼠脑组织中GTP环水解酶Ⅰ—GTPCH基因在转录水平的表达下调,补偿嘌呤核苷酸可以减轻海洛因对GTPCH基因转录产生的这种抑制效应。5.海洛因引起大鼠脑组织发生多种病理结构的改变,补偿嘌呤核苷酸可以改善海洛因引起的大鼠脑组织病理结构的改变。6.海洛因使大鼠脑组织中胶质纤维酸性蛋白GFAP表达升高,补偿嘌呤核苷酸可以减轻海洛因对GFAP表达产生的影响。7.海洛因使大鼠脑组织中凋亡蛋白酶caspase-3表达增多,补偿嘌呤核苷酸能够抑制海洛因对caspase-3表达产生的影响。8.海洛因以剂量依赖的方式抑制大鼠C6神经胶质瘤细胞增殖,嘌呤核苷酸以剂量依赖的方式促进C6神经胶质瘤细胞增殖,拮抗海洛因对C6细胞产生的增殖抑制作用。9.海洛因使C6神经胶质瘤细胞中凋亡蛋白酶caspase-3表达升高,给海洛因的同时给与嘌吟核苷酸能减少C6神经胶质瘤细胞中caspase-3的表达。综上,本课题在分子水平、细胞水平及整体水平阐述海洛因的毒性作用及补偿嘌呤核苷酸产生的生物学效应,并探讨海洛因和嘌呤核苷酸发挥作用的分子机制,为阿片类药物的作用机制研究及成瘾的治疗研究提供一种新的理论和实验依据。
郑小波[6]（2010）在《c-jun对仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌影响的机理研究》文中指出两性配子的生成是动物繁衍的前提和基础,睾酮在精子生成过程中具有十分重要的作用。睾酮不仅在精子生成过程中具有十分重要的作用,而且睾酮还参与维持雄性动物的第二性征,对精子的活力、授精的成功率也有重要的影响。间质细胞是雄性动物体内产生睾酮最主要的细胞,研究间质细胞睾酮合成的调控机制对于深入认识精子生成的分子机制,预防和治疗雄性不育均有十分重要的意义。关于睾酮合成机制的研究以往多集中在下丘脑-垂体-睾丸轴内分泌调节和促性腺激素对睾酮合成的影响上,但近年来的研究表明,原癌基因的表达在睾酮合成中起着十分重要的作用。本研究以荣昌猪为实验动物,利用体内体外模型探讨原癌基因c-jun对睾酮合成的调节机制,为进一步认识原癌基因在精子生成中的作用提供基础数据。大量的研究表明,睾丸间质细胞的睾酮分泌也伴有某些原癌基因的表达变化,特别是即时早期基因的表达变化。这些即时早期基因主要包括fos成员和jun家族。我们以c-jun为目的基因,以1、3、5周龄的荣昌仔猪睾丸为研究对象,采用实时荧光定量RT-PCR方法和放射免疫法研究了c-jun mRNA在仔猪睾丸中的表达及表达与血浆睾酮水平的关系,并切片观察睾丸组织结构的变化。实验结果表明：c-jun mRNA在1、3、5周龄仔猪睾丸组织中均有表达。其中3周龄表达较高,5周龄次之,1周龄较低,3周龄与5周龄和1周龄相比存在显着差异（P<0.05）。血浆睾酮水平在第3周最高,在其他时期较低,3周龄与1周龄、5周龄比较差异显着（P<0.01）,3周龄仔猪睾丸间质细胞结构逐渐完整,5周龄数量有所下降。c-jun mRNA的表达与血浆睾酮水平及间质细胞结构变化可能存在一致性。3周龄荣昌仔猪睾丸作为研究睾酮分泌机制的材料是适宜的。通过不同时间仔猪睾丸组织c-jun mRNA表达分析发现,其表达水平与血浆睾酮浓度检测结果有一致性。为了进一步了解c-jun mRNA表达和睾酮分泌的关系,采用了体外培养的间质细胞进行研究,目的是排除其他细胞（如支持细胞、生精细胞）的干扰。通过锥虫蓝试验和3β-HSD酶活性检测,用酶解法结合差速离心分离的荣昌仔猪间质细胞数量较多,纯度较高,其活力为（93.0±4.9）%,纯化后的细胞百分率为（85.1±3.6）%。睾酮基础分泌量随培养的时间延长而增高,两者呈线性关系（r=0.826,P<0.01）,培养至4h后增长峰趋于平缓。随着hCG刺激浓度的增加,睾酮分泌量增加,两者呈明显线性关系（r=0.893,P<0.01）。当hCG浓度达到50IU/mL时,诱导睾丸间质细胞睾酮分泌量最高。本实验中均采用50IU/mL为hCG诱导浓度。为了进一步准确了解c-jun mRNA表达与睾酮分泌的关系,我们采用了反义核酸技术,即将c-jun基因制备成反义c-junASODNs与体外培养的3周龄睾丸间质细胞共育,了解c-jun表达与睾酮分泌的量效关系。同时,通过MTT和TUNEL法了解睾丸间质细胞睾酮分泌过程中细胞增殖和凋亡的作用。结果显示,c-jun ASODNs以剂量依赖性方式抑制基础状态下睾酮分泌（P<0.01）及睾丸间质细胞增殖（P<0.01）,当加入1μmol/L c-junASODNs时,显着抑制睾丸间质细胞的凋亡（P<0.05）。这表明c-jun可促进基础状态下仔猪睾丸间质细胞睾酮的分泌,这种作用与c-jun促进睾丸间质细胞增殖和凋亡有关。睾丸间质细胞的分泌有基础性分泌和促性腺激素诱导的分泌,后者受下丘脑—垂体—性腺轴调节。绒毛膜促性腺激素hCG可与间质细胞表面受体结合,使ATP（?）→cAMP,而cAMP可动员胆固醇经过一系列中间步骤,最终生成睾酮。本试验通过c-jun ASODNs诱导观察c-jun在调节hCG诱导的仔猪睾丸间质细胞分泌的作用,采用c-jun ASODNs拮抗c-jun,维拉帕米阻断钙通道,添加cAMP观察其对体外培养睾丸间质细胞睾酮分泌的影响。结果发现hCG可刺激荣昌仔猪睾丸间质细胞的睾酮分泌,c-jun ASODNs（0.125-2μmol/L）呈剂量依赖性抑制hCG诱导离体睾丸间质细胞的分泌（P<0.01）,加用cAMP后睾酮分泌增加,可逆转c-jun ASODNs抑制hCG诱导离体睾丸间质细胞的睾酮分泌。维拉帕米（10-5mol/L）可增加c-jun ASODNs抑制睾酮分泌作用。因此,推测c-jun在促进hCG诱导间质细胞分泌睾酮过程中,主要通过以下信号途径传递信息：（1）hCG作用于仔猪睾丸间质细胞膜特异性受体,通过G蛋白介导,激活腺苷酸环化酶,从而使cAMP生成增多,然后以cAMP作为第二信使,通过cAMP-PKA途径导致核内原癌基因c-jun转录和翻译,其表达产物间或产物与c-fos蛋白在亮氨酸拉链区（1eucne zipper）形成同源或异源二聚体复合物,与靶基因的AP-1 （activator protein 1）位点结合,直接调节转录活性,激活一些晚期基因转录,如P450c17mRNA,后经过一系列酶作用,促进睾酮的合成和分泌。（2）hCG作用于睾丸间质细胞膜上特异性受体,使细胞内Ca2+浓度增高,然后以Ca2+作为第二信使,通过IP3-DAG-钙调蛋白激酶途径继而使核内原癌基因c-jun转录激活。其表达产物间或产物与c-fos蛋白在亮氨酸拉链区形成同源或异源二聚体复合物,与靶基因的AP-1位点结合,直接调节转录活性,激活一些晚期基因转录,如P450c17 mRNA,然后经过一系列酶作用,促进睾酮的合成和分泌。综上所述,我们可以得到以下结论：1、c-jun mRNA在1、3、5周龄荣昌仔猪睾丸中均有表达,3周龄较高,其变化趋势与血浆中睾酮水平变化有一致性。2、酶解法结合差速离心分离的荣昌仔猪间质细胞活力强,纯度较高,数量较多。随着培养时间延长,睾酮分泌量增加,4h达峰值。随着hCG的浓度增加,睾酮分泌增加,50IU/mL的hCG刺激的睾酮分泌达峰值。3、c-jun能剂量依赖性促进基础状态下的睾酮分泌,可能与促进间质细胞增殖和凋亡有关。4、c-jun能剂量依赖性影响hCG诱导的睾酮分泌。5、c-jun在调节hCG诱导睾酮的分泌过程中,可能的机制是通过hCG→激活受体→激活第二信使（cAMP,Ca2+）→诱导c-jun基因转录mRNA→在胞浆内表达产物c-Jun进入核内其表达产物间或产物与c-fos蛋白在亮氨酸拉链区（1eucine zipper）形成同源或异源二聚体复合物,与靶基因的AP-1 （activator protein-1）位点结合→激活一些晚期基因转录,如P450c17mRNA,后经过一系列酶促作用→促进睾酮的合成和分泌。
谢果[7]（2010）在《茶叶嘌呤生物碱抗抑郁作用及其机制的研究》文中研究指明目的：（1）研究1,3,7,9-四甲基尿酸（TC）、咖啡因（CAF）、可可碱（TB）、茶碱（TP）等茶叶嘌呤生物碱对抑郁的影响,并探讨可能的作用机制。（2）比较TC提取方法并优化TC提取分离的工艺条件。方法：（1）采用回流法、微波法及超声波法对苦茶TC成分进行提取；采用真空升华法来分离纯化TC；实验设计方法采用正交设计来获取各因素的影响及优化最佳工艺条件。（2）采用小鼠自主活动实验、悬尾实验、强迫游泳实验、利血平实验、育亨宾毒性实验、5-HTP诱导甩头实验及大鼠慢性不可预知温和应激（CUMS）实验来评价茶叶嘌呤生物碱对抑郁的影响。（3）采用HPLC-ECD来分析检测茶叶嘌呤生物碱对·CUMS大鼠皮质、海马、下丘脑等部位DA、5-HT、NE、DOPA、HVA和5-HIAA等单胺类神经递质及衍生物含量的影响。（4）采用全细胞膜片钳技术来评价茶叶嘌呤生物碱对低渗激活的容积敏感性氯电流的影响。（5）采用HPLC法测定茶叶嘌呤生物碱对PDE4体外抑制的影响。（6）采用RT-PCR技术检测茶叶嘌呤生物碱对PC12细胞腺苷受体A1、A2A、CREB、BDNF和TrkB mRNA表达的变化。结果：（1）对于回流法提取TC,其影响因素的顺序为回流温度>回流时间>pH,其中回流温度具有非常显着的影响（p<0.01）；最佳工艺条件为：回流时间为50 min,回流温度为90℃,pH为7.5。对于微波法提取TC,其影响因素的顺序为pH>微波时间>微波功率,其中pH具有显着的影响（P<0.05）；其最佳工艺条件为：微波时间为10 min,微波功率为480 W,pH为7.5。对于超声波法提取TC,其影响因素的顺序为pH>超声波时间>超声波功率,其中pH具有非常显着的影响（P<0.01）；其最佳工艺条件为：超声波时间为10 min,超声波功率为450 W,pH为7.5。对于真空升华分离纯化TC,其影响因素的顺序为真空度>升华时间>升华温度,其中升华时间和真空度有显着性影响（p<0.05）；其最佳工艺条件为：升华温度为175℃,真空度为0.10×105 Pa,升华时间为1 min。（2）小鼠的自主活动实验结果表明,CAF具有十分明显的兴奋作用（P<0.01）,TB和TP也有显着性作用（P<0.05）,而TC虽然可增加自主活动的总路程,但无统计学意义。小鼠悬尾实验、强迫游泳实验结果表明,TC可显着缩短行为绝望小鼠的不动时间用（P<0.01）,CAF对行为绝望小鼠的不动时间缩短非常显着（P<0.001）,TB只对强迫游泳小鼠不动时间有显着缩短（P<0.05）,TP虽然对行为绝望小鼠不动时间有缩短的趋势,但无统计学意义。CUMS实验结果表明,10 mg·kg-1和30 mg·kg-1 TC可非常显着地增加CUMS大鼠的体重（P<0.001）,并显着改善大鼠蔗糖偏嗜度（P<0.05）；CAF对CUMS大鼠体重和蔗糖偏嗜度都有改善的趋势,但无统计学意义；TP和TB只可十分显着地增加CUMS大鼠的体重（P<0.05）。利血平实验、5-HTP诱导小鼠甩头实验结果表明10 mg·kg-1和30mg·kg-1TC对于抑郁特征具有良好的改善作用（P<0.05）,CAF、TB和TP只对利血平实验有非常显着的改善（P<0.001）。四种茶叶嘌呤生物碱对育亨宾毒性增强的趋势都无统计学意义。（3）茶叶嘌呤生物碱对CUMS大鼠皮质、海马、下丘脑等部位的DA、5-HT、NE、DOPAC、HVA和5-HIAA等单胺类神经递质或其衍生物含量都有一定程度改善,其中TC在几乎所有的神经递质的紊乱中都表现出了显着性改善作用,并对5-HT和DA等神经递质代谢异常有良好的改善。TP及TB对CUMS大鼠脑部单胺类神经递质及其衍生物的紊乱及代谢异常的改善作用较弱。CAF对CUMS大鼠脑部单胺类神经递质及其衍生物的紊乱及代谢异常的改善作用基本无统计学意义。（4）茶叶嘌呤生物碱对低渗激活的容积敏感性氯电流都有一定程度的抑制作用,其中TC与CAF有显着性抑制作用（P<0.05）,抑制作用强弱顺序为：TC>CAF>TB≈TP。（5）茶叶嘌呤生物碱对体外cGMP为底物的PDE4基本无抑制效果；对cAMP为底物的PDE4有较强的抑制作用,抑制作用强弱顺序为：TC≈CAF>TB≈TP。（6）茶叶嘌呤生物碱对PC12细胞的腺苷A1、A2A mRNA都的表达有一定程度的抑制作用,其中TC与CAF都有较强的显着性作用（P<0.05）；对CREB mRNA表达都有一定的增强作用,但无统计学意义；对BDNF和TrkB mRNA表达有都显着的增强作用（P<0.05）,且TC效果最为显着（P<0.01）。结论：（1）相对于常规的回流法,微波法、超声波法都能高效、经济及环保地提取TC；真空升华法分离TC时,具有快速、高效,且环境条件要求低,成本十分低廉等优点；正交设计不仅可以有效地分析TC制备的各影响因素,而且可以较好地获得TC制备的最佳工艺条件。（2）TC具有较强的抗抑郁作用,可能是源于对实验动物单胺类神经递质含量紊乱的改善和神经元的保护功能；CAF对行为绝望动物的行为学影响可能是中枢兴奋的结果；TP与TB可能具有较弱的抗抑郁作用。（3）TC等茶叶嘌呤生物碱对抗抑郁的作用机制主要涉及：1)腺苷受体-AC-cAMP/PKA-CREB-BDNF-TrkB通路；2)PDE-cAMP/PKA-CREB-BDNF-TrkB途径。3)氯通道的GABA等嘌呤受体的补充途径；4)神经递质对离子通道的修饰作用等几个信号转导通路。创新点：（1）本论文首次提出了TC抗抑郁的假说,并通过各种行为学实验证实了TC抗抑郁的效果；而初步阐明了TC抗抑郁作用的主要机制。此研究不仅有助于苦茶及TC的深入开发,对于推动我国天然抗抑郁药物现代化和国际化的进程也具有重要意义。（2）首次题出氯通道对中枢神经系统抑郁等方面作用。（3）本论文首次系统比较了TC、CAF、TB和TP四个典型的茶叶生物碱对抑郁作用特点。（4）本论文通过逆向排除CAF的思路,首次采用了真空升华法制备了纯度和产率较高的TC。
李朝晖[8]（2010）在《大鼠骨髓间充质干细胞侧脑室植入对SAH后CVS大鼠的影响》文中提出一、大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养、鉴定及神经元条件培养基对其定向诱导分化目的:掌握骨髓间充质干细胞（Bone Marrow Mesenchymal Stem cells, BMSCs）原代和传代培养方法,并对其进行鉴定,探讨应用海马神经元条件培养基对其进行定向诱导分化。方法:体质量（125±25）g SD大鼠,取股骨、胫骨,骨髓腔用DMEM培养基冲出骨髓于离心管中,吹打制成单细胞悬液。接种于培养瓶中,37℃,5% CO2培养箱中培养。取P5细胞爬片多聚甲醛固定,加一抗（兔抗大鼠CD44、CD34）,生物素化二抗,37℃孵育1 h,DAB染色,酒精脱水、二甲苯透明,中性树胶封片、显微镜下观察。取原代培养的海马神经元培养液,作为海马神经元条件培养基。另外一组加入碱性成纤维细胞生长因子（Basic-Fibroblast Growth Factor, b-FGF）和10%二甲基亚枫（Dimethl Sulfoxide, DMSO）无血清培养基,最后一组以神经元培养基（Neurobasal加B27）作为神经元基础培养基阳性对照,阴性对照为原培养基（DMEM加10% FBS）继续培养。第5代（Passage 5, P5）BMSCs接种在放有盖玻片的6孔培养板里,爬片后换为基础培养基,海马神经元培养基和无血清培养基（含b-FGF和10%DMSO的无血清L-DMEM培养基）进行诱导,分别将诱导12 h和1 d的细胞用4%多聚甲醛固定。加入小鼠抗大鼠微管相关蛋白（Microtubula association protein-2, MAP-2）,兔抗鼠神经元特异性烯醇化酶（Neurospecific enolase, NSE）及兔抗鼠胶质纤维酸性蛋白（Glia fibrillary acidic protein, GFAP）一抗。光镜下观察MAP-2、NSE和GFAP表达阳性细胞,计数阳性细胞百分率并进行显微摄影。结果:大鼠BMSCs原代培养,半量换液,悬浮的杂质细胞被清除,贴壁细胞的形态清晰可见并开始迅速增殖。7～9 d左右细胞可长满培养瓶底。大鼠BMSCs传代培养生长较原代快,5～7 d细胞达90%融合。H-E染色BMSCs表现为细胞核大,圆形,居中深染,嗜碱性;胞质着色浅,呈弱嗜酸性,细胞平行排列。兔抗大鼠CD34,CD44免疫细胞染色,BMSCs为CD34染色阴性细胞,而CD44表达阳性,这些CD44阳性细胞胞核和胞浆呈棕褐色。海马神经元条件培养液、b-FGF的无血清培养基和含B27的Neurobasal培养基对P5的BMSCs诱导12 h和1 d后,诱导后细胞体逐渐变成圆形和锥形,细胞向外伸出突起。随着时间延长,突起也逐渐延长,1 d后可见有些连接形成网状。诱导后的BMSCs免疫细胞化学染色,神经类标记物MAP-2,NSE和GFAP进行标记,计数细胞阳性率,以12 h后海马神经元条件培养基的诱导阳性率最高。结论:1应用全骨髓结合贴壁分离法成功建立了一种体外简单、快速的大鼠BMSCs原代及传代培养方法,在体外能够进行迅速增殖,且性状稳定。2体外培养的BMSCs经免疫细胞化学染色,表达间充质干细胞表面标记,证明非造血干细胞。3应用含b-FGF的DMEM培养基、海马神经元条件培养基、无血清培养基诱导BMSCs 12 h与1 d,BMSCs均可分化成为神经元样细胞和神经胶质样细胞,经免疫细胞化学染色均表达NSE、MAP-2和GFAP。4三种培养基诱导BMSCs,以12 h的诱导率最高,可达到44.78%,其中海马神经元条件培养基的诱导效率高于其它两组,差异有显着性。二、大鼠SAH后CVS模型制备及行为学、生物学指标测定目的:大鼠自体血枕大池二次注血法制造蛛网膜下隙出血（Subarachnoid Hemorrhage, SAH）后脑血管痉挛（Cerebro Vascular Spasm, CVS）的动物模型,测定血和脑组织中一氧化氮合酶（Nitric Oxide synthesis, NOS）及内皮素-1（Endotheliam-1, ET-1）含量的变化,测量脑血管痉挛后的血管直径,结合行为学改变对脑血管痉挛动物模型进行评定。方法:枕大池二次注血法建立蛛网膜下隙出血模型,尾动脉取血,脑立体定位仪下环枕膜处自体动脉血约5 min注完,于2 d后再次同样的方法二次注血。手术后大鼠参照神经功能等级评分表评定,在1 d、2 d、3 d、5 d、7 d对SAH和对照组大鼠分别评分。10%印度墨水血管灌注,45倍体视显微镜下,应用Nikon NIS-Elements BR 3.0和Image J图像分析系统,测量基底动脉、颈内动脉和大脑中动脉直径。另外应用同样灌注技术,海马组织切片于前囱后4 mm处切开,体视显微镜放大评价微血管充盈状态。于SAH成功后1 d、2 d、3 d、5 d及7 d时间取血,分离海马及皮层组织,取组织上清液测定血清及脑组织匀浆中NOS、ET-1含量。注射血液结束后14 d,进行Morris水迷宫测试。所有数据均用±s表示,应用SPSS14.0软件包进行分析,对照组和实验组间比较用Dunnett-t检验,组间比较用SNK-q检验,神经生物功能评分和脑血管直径,NOS和ET-1含量进行多元线性回归,Morris水迷宫中的平均潜伏时间和NOS、ET-1含量及脑血管直径的关系也进行多元线性回归。结果:大鼠SAH后警觉性低,毛发杂乱,饮水摄食行为差,自洁性差,于次日后稍好转,但二次注血后加重,少数可出现偏瘫。术后脑内有血凝块,主要位于小脑延髓池内,1 d可见有陈旧性血液。在海马（前囟后4 mm）切片处可见大脑皮层血管在SAH组血管较少,血管变细。测量大脑中动脉,基底动脉和颈内动脉直径,在SAH组2 d和3 d组血管直径与生理盐水和对照组相比有明显差异（P<0.05）。SAH大鼠在1 d、2 d、3 d、5 d、7 d可见神经功能评分明显增高,与对照组、生理盐水组相比有明显的统计学差异（P<0.01）。SAH后1 d、2 d、3 d、5 d、7 d组脑组织和血液中ET-1均高于对照组和生理盐水组（P<0.05）。进行神经生物功能评分与脑血管直径、NOS和ET-1含量分析,建立回归方程为:Y=-3.586+0.059X1-0.55 X2,X1为血中ET-1的含量,X2为大脑中动脉的直径,可见神经生物功能评分与血中ET-1的含量呈正相关,与大脑中动脉的直径呈负相关,血中ET-1和大脑中动脉相比对神经生物学功能评分的密切程度没有明显统计学差异（P>0.05）。SAH组Morris水迷宫游泳距离明显增长,逃避潜伏期时间较长。在随后的几天实验中各组逃避潜伏期时间逐渐缩短,SAH组成绩虽有提高,但其逃避潜伏期始终维持在较高水平,平均潜伏期与血中ET-1含量呈正相关。SAH组大鼠跨越平台次数明显少于对照组。结论:1大鼠自体尾动脉取血枕大池二次注血后,可见各脑池脑沟内有明显的陈旧血凝块聚积,说明蛛网膜下隙出血模型成功。2大鼠脑血管管径测量显示SAH血管变细,血管灌注显示有脑血管灌注不足,证明SAH后有脑血管痉挛的缺血表现。3 SAH组血和脑内NOS含量低于对照组,ET-1含量升高,表明SAH后有脑血管痉挛。4 SAH组神经生物学功能评分均明显高于其它组,证明脑血管痉挛后有行为学表现功能下降。5 Morris水迷宫测试表明SAH后大鼠的空间学习记忆能力有一定下降。三、BrdU标记的BMSCs侧脑室植入后对SAH后CVS大鼠行为学影响的研究目的:通过BMSCs侧脑室植入SAH后CVS大鼠,观察标记的BMSCs在大鼠脑内生长情况,结合行为学检测评价BMSCs植入后效果。方法:第5代BMSCs,用5-溴脱氧尿核苷（Bromodeoxyuridine, BrdU）标记2 d。将标记后的细胞爬片进行免疫细胞化学染色,一抗为BrdU抗体。标记好的细胞以5×106的细胞悬液侧脑室注入SAH后的大鼠。SAH大鼠以其神经功能评分为参照,随机分为三组:SAH组、SAH后植入DMEM组和SAH后BMSCs植入组。SAH组不植入干细胞,而DMEM组于第二次注血2 d后立体定向仪下用微量注射器注入30μLDMEM培养基。BMSCs组在第二次注血后2 d立体定位仪下注入30μL的BMSCs悬液。BMSCs组中5只大鼠于14 d后进行Morris水迷宫检测,另外5只取脑进行免疫组化染色。脑立体定位仪下大鼠侧脑室穿刺取前囟定位,前囟后1.2 mm,中线旁2 mm处进针,接上已事先抽好BMSCs悬液或是DMEM的微量注射器,深度为4.5 mm,将30μL BMSCs悬液或DMEM培养基缓慢注入侧脑室。各组大鼠在注射后14 d麻醉,固定取脑,切片,进行免疫组化染色,H2O2灭活内源性酶,加入抗原修复液,生物微波炉加热抗原修复,滴加5% BSA封闭液,一抗（小鼠抗BrdU IgG）,37℃1 h,生物素化二抗,37℃20 min,DAB染色,脱水透明,中性树胶封片。SAH组及DMEM组、BMSCs组1 d、2 d、3 d、5 d、7 d后行神经生物学功能评分,于14 d后进行水迷宫检测。结果:BrdU标记后BMSCs,经免疫细胞化学染色为胞核着色,以胞核呈棕黄色者为阳性。脑立体定位仪下行侧脑室穿刺,以前囟定位,能准确注入侧脑室。SAH大鼠侧脑室穿刺注入干细胞悬液后无不良反应。脑石蜡切片DAB染色后,可见经BrdU标记的阳性细胞胞核呈棕褐色,阳性细胞在切片内无明显规律,散在分布于阴性细胞之间。DMEM组可见阴性细胞核仍呈蓝色。将SAH组、DMEM组及BMSCs组大鼠于注射后1 d、2 d、3 d、5 d、7 d进行神经生物功能评分,无论是SAH组还是DMEM、BMSCs组可见,在各组里以1 d神经生物学功能评分普遍高于其它组（P<0.05）,以后评分逐渐下降,BMSCs组大鼠在7 d时与DMEM和SAH组相比,神经生物功能评分明显减低,感觉运动功能恢复（P<0.05）。Morris水迷宫检测BMSCs组大鼠平均逃避潜伏期时间比SAH组和DMEM组要短,有统计学差异,探索实验显示BMSCs组跨越平台的次数多于其它两组,差异有明显统计学意义（P<0.05）。结论:1 BrdU可以用来标记BMSCs,标记后的细胞可用相应的抗体检测。2脑立体定位仪下以前囟后1.2 mm,中线旁2 mm处进针,深度为4.5 mm的位置能准确注入侧脑室,注射后大鼠未见明显不良反应。3注入BrdU标记过的BMSCs后,取前囟后4 mm的海马组织切片免疫组化染色显示有BrdU阳性细胞存在。4生物学功能评分可见BMSCs组在7 d时评分下降,表明感觉和运动功能有一定程度的恢复。5 Morris水迷宫显示BMSCs组在学习记忆能力方面也有一定的改善。四、SAH后CVS大鼠移植BMSCs后海马神经元凋亡的研究目的:大鼠SAH后CVS模型基础上植入BMSCs,大鼠感觉、运动功能有一定程度的恢复,进一步观察BMSCs植入后对大鼠脑内海马神经元凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法:在第三部分大鼠脑组织切片基础之上,取SAH组、DMEM组和BMSCs组14 d前囟后4 mm处大脑皮层及海马组织石蜡切片,以兔抗鼠Bcl-2和Bax为一抗,进行免疫组织化学染色。图像分析软件分析阳性细胞数目比率。无菌条件下取SAH及BMSCs14 d组大脑,剥出海马,按每100 mg脑组织加入1 mL裂解液,超声裂解后低温离心,取上清,考马斯亮兰测定蛋白含量,蛋白变性后上样,电泳、转硝酸纤维素膜（NC膜）,脱脂奶粉封闭,分别加入兔抗大鼠Bcl-2、Bax一抗,4℃静置过夜。滴加辣根过氧化物酶标记二抗,免疫化学发光,X光片显影定影。使用Hema成像分析系统对显色条带进行半定量分析,测定各组蛋白相对表达水平。结果:与SAH组相比,BMSCs组海马可见Bcl-2阳性细胞数目增加,细胞呈黄褐色,深染;Bax阳性细胞数目减少,着色较浅。SAH组大鼠海马可见Bcl-2阳性细胞数目较少,着色浅;相反Bax阳性细胞数目增加,细胞呈棕褐色较深。DMEM组可见Bax阳性细胞数目增加,而Bcl-2阳性细胞数目相对减低。Western blot显示,DMEM组、SAH组和BMSCs组大鼠海马GAPDH表达三组基本相似,Bcl-2在BMSCs组比DMEM组和SAH组表达高（P<0.05）。Bax的表达在SAH组与DMEM组高于BMSCs组,相比有明显统计学差异（P<0.05）。结论:1 SAH后CVS模型大鼠侧脑室植入BMSCs后,大脑皮层和海马内可见神经元抑制凋亡相关基因表达增加,而促凋亡相关基因表达下降。2 SAH组14 d大鼠脑内促凋亡相关基因表达升高,抑制凋亡相关基因表达下降。3 DMEM组大鼠脑内仅有少量的抑制凋亡相关基因表达,促凋亡相关基因表达较高。五、SAH后CVS大鼠侧脑室植入BMSCs脑血管超微结构观察与血中NOS、ET-1含量变化目的:观察SAH后CVS大鼠侧脑室植入BMSCs后血中一氧化氮合酶、内皮素-1含量变化,同时透射电镜观察大鼠脑内血管和神经元超微结构改变,为细胞移植治疗提供理论和实验依据。方法:实验动物分组、SAH模型制备及BMSCs移植同前面几部分,分为正常对照组、SAH组及BMSCs组。于移植BMSCs后1 d、3 d、7 d进行取血,测定大鼠血中NOS和ET-1含量,具体方法同前面第二部分。同时取前囟后4 mm大脑皮层脑组织约1 mm×1 mm×2 mm大小,用2.5%戊二醛磷酸盐缓冲液中后固定1 d,备透射电镜检查。将标本用0.1 M磷酸缓冲液洗3次,质量分数为1%锇酸固定,逐级梯度乙醇、丙酮脱水,环氧树脂812包埋,聚合,用超薄切片机作0.5μm厚度切片,经1%甲苯胺蓝-天青II染色,光镜下定位后制作超薄切片,片厚约50 nm,铜网捞片,醋酸铀、柠檬酸铅液染色。日立H-7500型透射电镜观察各组大鼠大脑皮层神经元及微血管的超微结构,照相,记录。组间比较采用单因素方差分析,各组间两两比较采用SNK-q检验,P<0.05表示差异有统计学意义。结果:与对照组相比,SAH组后1 d、3 d、7 d血中NOS含量明显下降,而血中ET-1含量则明显上升,其中以SAH 3 d组血中ET-1升高最为明显,差异有统计学意义。与SAH组相比,BMSCs组可见血液中ET-1含量逐渐下降,而NOS含量上升,差异有统计学意义。与正常组相比,BMSCs组ET-1含量仍然较高,差异有明显统计学意义（P<0.05）,血中NOS含量有一定下降,与对照组相比不能说明有差异（P>0.1）。透射电镜显示,对照组神经元细胞核大而圆,染色质密度均匀,核仁明显,核膜完整。大脑皮层毛细血管可见其内皮细胞内膜光滑,细胞核、细胞器、紧密连接清晰可见,内皮细胞的基质和基膜完整,层次清楚,管腔无狭窄。SAH组可见大脑皮层神经元和微血管内皮细胞的水肿程度达到高峰,神经元高度水肿,线粒体肿胀,可见部分凋亡、坏死神经元。BMSCs组大脑皮层神经元和微血管内皮细胞可见轻度水肿,血管内皮细胞的吞饮小泡略减少。微血管内皮细胞核固缩,管腔内微绒毛减少,管腔狭窄有一定缓解。结论:1 SAH后CVS大鼠侧脑室移植BMSCs后ET-1下降,NOS含量升高。说明脑血管痉挛有一定程度的缓解。2脑组织及血管超微结构观察,SAH组大脑皮层神经元坏死加重,部分微血管闭塞。BMSCs移植后神经元的凋亡与死亡减少,微血管闭塞有一定的缓解。
段炜[9]（2009）在《腺苷A2A受体基因敲除对慢性低灌注白质损伤的影响及其与炎性效应调控的关系》文中进行了进一步梳理供应脑实质深穿支小动脉的广泛病变,或颈部大动脉及其颅内分支动脉的狭窄,导致大脑半球深部白质血流量降低,持续的低灌注状态可造成白质疏松,即缺血性白质脑病。缺血性白质脑病可以引起神经功能缺失,主要表现包括认知功能损害,是中老年血管性认知损害的主要病理类型之一。目前缺血性白质脑病的治疗方式主要是对症治疗和控制心脑血管疾病的危险因素,但治疗效果不满意,不能阻止疾病的进一步发展。因此,迫切需要探索缺血性白质脑病新的治疗策略和途径。缺血性白质脑病的分子病理机制仍不明确,对于慢性脑血流低灌注导致的脑组织能量代谢障碍和神经活性物质代谢障碍造成以白质损伤为主的病理损害的分子机制仍然缺乏清楚认识。以往研究发现慢性脑血流低灌注造成的白质损伤,同时伴有胶质细胞增生活化、白质区域炎性细胞浸润、某些炎性因子表达增加以及一氧化氮合成增加等,提示白质损伤与炎性病理过程有关,确切的机制尚需进一步研究阐明。腺苷是能量代谢的中间产物,也是中枢神经系统重要的神经调质。腺苷与其受体（A1、A2A、A2B和A3）结合后调节机体重要的生理活动,并参与多种致病因素引起的疾病过程。其中A2A受体参与机体多种生理活动的调节和某些疾病的病理过程,在某些疾病的动物实验研究中发现其治疗效应较明确,因此格外受到重视。许多研究已发现A2A受体拮抗剂或A2A受体基因敲除抑制了细胞外谷氨酸浓度的异常升高从而显着减轻急性缺血造成的脑损伤,提示对腺苷A2A受体的干预有可能成为治疗缺血性脑损伤的新途径。慢性低灌注性白质损伤的组织病理改变及病理机制与急性脑缺血性损伤有显着差异,腺苷A2A受体在慢性低灌注性白质损伤发生发展中的作用仍不清楚。此外,A2A受体也存在于外周血液中的炎性细胞和免疫细胞,研究证实A2A受体激活显着抑制外周炎性细胞和免疫细胞的黏附和迁移,减少炎性因子的分泌,从而产生抗炎效应,减轻多种致炎因子造成的炎性病理损伤,那么A2A受体是否通过对炎性效应的调控从而对慢性低灌注性白质损伤的结局产生影响?为了阐明A2A受体对慢性低灌注性白质损伤的影响及其可能机制,首先,我们参照Shibata等方法用内径为0.18mm的微型弹簧圈套双侧颈总动脉建立小鼠慢性脑血流低灌注模型,在建模第30d采用八臂迷宫实验对模型小鼠进行认知功能评价;在建模第7d、14d和30d分别采用Kluver-Barrera染色、抗GFAP、CD11b免疫组织化学染色观察模型小鼠在建模后不同时间点白质区域的神经纤维损伤程度及胶质细胞增生程度;同时,在建模后第14d采用抗CD3免疫组织化学染色及伊文氏蓝荧光显微镜观察来评价模型小鼠白质区域淋巴细胞浸润情况及血脑屏障的完整性。其次,我们采用腺苷A2A受体基因敲除技术,观察A2A受体缺失对慢性低灌注性白质损伤的影响。A2A受体基因敲除小鼠及其同窝野生型小鼠分别制作慢性脑血流低灌注模型,采用八臂迷宫实验评价A2A受体基因敲除小鼠及同窝野生型小鼠在建模第30d时认知功能的变化;在建模第7d、14d和30d分别采用Kluver-Barrera染色、抗GFAP、CD11b免疫组织化学染色观察A2A受体基因敲除小鼠及同窝野生型小鼠在建模后不同时间点白质区域的神经纤维损伤程度及胶质细胞增生程度;采用抗CD3免疫组织化学染色观察A2A受体基因敲除小鼠及同窝野生型小鼠在建模第14d白质区域淋巴细胞浸润情况;同时,采用PCR及western blot方法检测A2A受体基因敲除小鼠及同窝野生型小鼠在建模第7d、14d和30d胼胝体的TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA和蛋白水平。最后,我们将雌性A2A受体基因敲除小鼠的骨髓细胞通过尾静脉注射入γ射线全身照射后的雄性C57BL/6小鼠体内,从而建立选择性骨髓来源细胞A2A受体缺失模型,观察外周骨髓来源细胞A2A受体在慢性低灌注性白质损伤发生发展中的作用及其机制。骨髓细胞成功移植后的嵌合子小鼠制作慢性脑血流低灌注模型,在建模第7d、14d和30d分别采用Kluver-Barrera染色、抗GFAP、CD11b免疫组织化学染色观察嵌合子小鼠白质区域神经纤维损伤程度及胶质细胞增生程度;采用western blot方法检测嵌合子小鼠在建模第7d、14d和30d胼胝体的TNF-α和IL-1β蛋白水平。经过以上实验研究,我们得到一下结果:一、小鼠慢性脑血流低灌注模型的建立1.采用特制微型弹簧圈套小鼠双侧颈总动脉成功建立慢性脑血流低灌注小鼠模型。建模后小鼠死亡率为18.9%。建模后30d各个检测时间点模型小鼠的平均体重与假手术组比较无差异。2.在建模第30d模型小鼠八臂迷宫实验的平均工作记忆错误显着增多。3.在建模第7d时模型小鼠白质区域未见组织病理改变。在建模第14d和30d时模型小鼠白质区域可见神经纤维排列紊乱、稀疏,有空泡形成,同时星型胶质细胞和小胶质细胞增生,以胼胝体最为显着,内囊次之,视束最轻。模型小鼠随着建模时间延长,白质损伤程度分级逐渐增加,白质区域胶质细胞数目显着增多。4.在建模第14d模型小鼠胼胝体区域可见散在单个的CD3阳性细胞分布,其余白质区域则未见。并且模型小鼠胼胝体CD3阳性细胞数目显着多于相同时间点的假手术小鼠。在建模第14d模型小鼠胼胝体区域小血管边缘毛糙,成锥形突触,提示存在伊文蓝外渗现象。二、腺苷A2A受体基因敲除对慢性低灌注性白质损伤的影响及其与炎性效应调控的关系1.在建模后A2A受体基因敲除小鼠的死亡率为22.3%,野生型小鼠死亡率为16.7%。建模后30d各个检测时间点A2A受体基因敲除小鼠的平均体重与野生型小鼠无显着差异。2.在建模第30d时A2A受体基因敲除小鼠八臂迷宫实验平均工作记忆错误比相同时间点的野生型小鼠显着增多。3.在建模第7d时2组小鼠白质区域均未见显着组织病理改变。在建模第14d和30d时2组小鼠白质区域可见神经纤维稀疏、空隙增加、空泡形成,同时星型胶质细胞和小胶质细胞增生,A2A受体基因敲除小鼠在建模第30d白质区域可见胞体增大变圆,突起变短的活化小胶质细胞。在建模第14d和30d时A2A受体基因敲除小鼠白质损伤程度分级显着高于同时间点的野生型小鼠,同时A2A受体基因敲除小鼠白质区域胶质细胞数目显着多于相同时间点的野生型小鼠。4.在建模第14d时2组小鼠胼胝体区域均可见到CD3阳性细胞分布,并且A2A受体基因敲除小鼠在建模第14d胼胝体区域CD3阳性细胞数目显着多于相同时间点的野生型小鼠。5.在建模第7d、14d和30d时A2A受体基因敲除小鼠胼胝体TNF-α和IL-1β的mRNA水平与相同时间点的野生型小鼠比较显着增高,在建模第30d时A2A受体基因敲除小鼠胼胝体IL-6的mRNA水平显着高于相同时间点的野生型小鼠。在建模第30d时A2A受体基因敲除小鼠胼胝体TNF-α和IL-6蛋白水平显着高于相同时间点的野生型小鼠,在建模第14d和30d时A2A受体基因敲除小鼠胼胝体IL-1β蛋白水平显着高于相同时间点的野生型小鼠。三、骨髓来源细胞A2A受体对慢性低灌注白质损伤的影响1.选择性骨髓细胞腺苷A2A受体缺失模型的建立和评价（1）骨髓细胞移植前雄性受体小鼠性染色体相关基因PCR产物电泳结果有330bp和300bp两条条带,但骨髓细胞移植后雄性受体小鼠性染色体相关基因PCR产物电泳结果仅有330bp一条带,与雌性小鼠性染色体PCR产物电泳结果相符。（2）野生型小鼠骨髓细胞移植入C57BL/6小鼠体内的嵌合子小鼠（WT→WT组）外周血白细胞A2A受体免疫细胞荧光染色发现A2A受体阳性细胞率为（93.82±11.24）%,A2A受体基因敲除小鼠骨髓细胞移植入C57BL/6小鼠体内的嵌合子小鼠（KO→WT组）外周血白细胞A2A受体阳性细胞率下降至（9.73±2.05）%。2.骨髓来源细胞A2A受体对慢性低灌注白质损伤的影响（1） WT→WT组建模后小鼠死亡率为10.0%,KO→WT组建模后小鼠死亡率为21.05%。（2）在建模第7d时2组白质区域均未见明显的组织病理学改变,在建模第14d和30d时2组胼胝体、尾状核/壳核纤维束可见神经纤维排列紊乱、稀疏,内囊和视束均未见明显改变。在建模后第14d和30d,KO→WT组胼胝体和尾状核/壳核纤维束的神经纤维损伤级数与同时相点WT→WT组比较显着性增加。（3）在建模第7d、14d和30d时KO→WT组胼胝体和尾状核/壳核纤维束可见显着星型胶质细胞和小胶质细胞增生,WT→WT组胼胝体和尾状核/壳核纤维束仅在建模第14d和30d观察到胶质细胞增生,2组内囊和视束未见显着胶质细胞增生。在建模第7d、14d和30d时KO→WT组胼胝体和尾状核/壳核纤维束的胶质细胞数目显着多于相同时间点的WT→WT组。（4）与相同时间点的WT→WT组比较,KO→WT组胼胝体的TNF-α蛋白水平仅在建模第14d时显着升高;KO→WT组胼胝体的IL-1β蛋白水平在建模第14d和30d时均显着升高。综上所述,我们利用特制的微型弹簧成功建立了小鼠慢性脑血流低灌注模型,从行为学及组织病理学方面进行评价,证实了该模型是研究慢性低灌注白质损伤的可靠动物模型。腺苷A2A受体基因敲除加重慢性低灌注白质损伤,促进局部胶质细胞增生,促使白质区域炎性因子产生增多,提示A2A受体缺失可能是通过增强炎症反应而发挥影响。选择性骨髓来源细胞A2A受体基因敲除同样加重慢性低灌注白质损伤,促进局部胶质细胞增生和炎症因子的产生,表明骨髓来源的外周白细胞A2A受体可能在对慢性低灌注白质损伤的影响中发挥主导作用。
陈国华[10]（2008）在《黄角颗粒抗缺氧缺血神经元细胞凋亡作用的实验研究》文中研究指明目的脑血管病是危害人类生命健康的常见病、多发病,脑血管病的防治一直是我国卫生工作和医学研究的一项重要课题。黄角颗粒是武汉市第一医院神经内科在多年临床经验总结的基础上研制的治疗脑卒中的有效院内制剂。本课题拟针对脑缺血后的病理生理机制,在中医基础理论指导下,以神经细胞凋亡为切入点,通过在体和体外细胞培养实验,观察黄角颗粒对caspase依赖的线粒体内源性凋亡途径以及非caspases介导的AIF凋亡途径的作用来深入探讨其脑保护机制,旨在深层次探索中药复方的药效及其作用机理。方法1.在体实验:取清洁级Wistar大鼠若干只,参照文献采用longa改进线栓法制作大脑中动脉栓塞动物模型。按体重随机分为六组:假手术对照组（简称假手术组）、模型对照组（简称模型组）、尼莫地平组（简称西药组）、黄角颗粒10g/kg、5g/kg、2.5g/kg组（简称大、中、小剂量组）。第一部分观察黄角颗粒对实验性局灶性脑梗死大鼠神经功能缺损及脑组织形态变化的影响,测定脑梗死大鼠脑组织含水量及脑组织梗死体积。第二部分采用原位细胞凋亡检测及免疫组化方法检测脑组织神经细胞bcl-2,bax,Caspase-3阳性细胞的表达等,观察黄角颗粒对实验性局灶性脑梗死大鼠caspase依赖的线粒体内源性凋亡途径的影响。2.体外细胞培养实验:即第三部分,采用“血清药理学”方法,利用黄角颗粒含药血清分别对神经研究中的常用的工具细胞PC-12细胞分化的类神经元缺氧缺血离体模型进行干预,再进行观察凋亡通路中AIF的变化,并与西药丁咯地尔盐酸盐进行比较,探讨黄角颗粒对细胞缺氧缺血保护作用实为拮抗凋亡通路的分子机制。结果1.实验性局灶性脑梗死大鼠模型组一般状态差,进食量锐减,逐渐消瘦,毛色灰暗无光泽,无脱毛,偏瘫症状明显,表现为左侧肢体废用或力弱,以前肢为重,行走呈逆钟向追尾状。黄角颗粒各剂量组及尼莫地平组动物一般状态较模型组好,治疗3天后治疗组和模型组症状均有不同程度恢复,治疗组症状改善明显,尤以大剂量治疗组为佳。2.实验性局灶性脑梗死大鼠脑组织含水量及梗死体积的变化:假手术组脑组织含水量无显着变化,未见梗死灶;模型组脑组织含水量显着增加,均出现梗死灶;而尼莫地平组和黄角颗粒不同剂量治疗组的脑组织含水量均显着降低,且梗死体积均明显低于模型组,与模型组比较有显着差异（P＜0.01）。光镜下可见,假手术组皮层神经元形态结构正常;模型组大鼠缺血侧大脑皮层神经元呈缺血性改变,大量神经元变性坏死、出现空泡,表现为胞体缩小呈三角形,胞浆为伊红性,核固缩深染,核仁消失等;海马CA1区神经元排列稀疏紊乱,有不同程度神经元脱失现象。黄角颗粒组、尼莫地平组缺血侧皮层神经细胞亦呈缺血改变,但只有部分细胞固缩,且深染程度较轻,细胞无缩小,细胞周围间隙改变不明显。3.实验性局灶性脑梗死大鼠脑神经细胞bcl-2,bax阳性细胞的比较:模型组大鼠脑神经细胞凋亡阳性细胞数及bax阳性细胞数显着高于正常组,bcl-2阳性细胞数显着低于正常组（P＜0.05,P＜0.01）;中药大、中、小剂量组及西药组大鼠脑神经细胞凋亡阳性细胞数及bax阳性细胞数显着低于模型组,bcl-2阳性细胞数显着高于模型组（P＜0.05,P＜0.01）;中药大剂量组大鼠脑神经细胞凋亡阳性细胞数及bax、bcl-2阳性细胞数与西药组间无显着性差异（P＞0.05）。4.实验性局灶性脑梗死大鼠脑神经细胞Caspase-3阳性细胞的比较:模型组与假手术组比较,Caspase-3蛋白阳性细胞数目明显增多（P＜0.01）,黄角颗粒大、中剂量组与西药组均可减少脑缺血诱导Caspase-3蛋白阳性细胞数目,与模型组比较有显着性差异（P＜0.05或P＜0.01）,尤以大剂量组为显着。5.利用黄角颗粒含药血清对PC-12细胞分化的类神经元缺氧缺血离体模型进行干预,经过24小时的缺氧缺血复氧复血清1小时后,对照组仍可观察到明显的AIF核移位,而黄角颗粒组和盐酸丁咯地尔组则未观察到AIF的核移位;缺血缺氧复氧复血清1小时与复氧复血清3小时相比,盐酸丁咯地尔和黄角颗粒含药血清均可同样阻止AIF的激活释放。结论急性期的有效治疗是影响预后的关键环节,针对急性期标实为主的临床证候特点,醒神定惊,祛除痰浊瘀血,通导腑实不失为适宜有效的治疗措施。由水牛角和生大黄两味药组方的黄角颗粒能够改善实验性脑梗死大鼠的梗死体积,减轻脑水肿,改善神经功能缺损程度。在caspase依赖的线粒体内源性凋亡途径中,黄角颗粒通过上调脑缺血诱导的Bcl-2蛋白表达,同时下调Bax蛋白表达,使Bcl-21Bax比值升高,促使Bax-Bcl-2异源二聚体形成;有效抑制Caspase-3的激活,从而直接抑制缺血神经元的凋亡,减轻脑缺血所致的脑损伤,发挥脑保护作用。同时,在AIF介导的caspase非依赖信号通路的研究中发现,黄角颗粒可有效防止AIF的激活释放,使细胞无法进入非Caspases介导的AIF凋亡途径。以上结果为黄角颗粒治疗脑梗死提供了实验依据,这可能是其治疗缺血性卒中的分子机制之一。
二、咖啡因对LY294002诱导的小脑颗粒神经元凋亡的拮抗作用(英文)（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、咖啡因对LY294002诱导的小脑颗粒神经元凋亡的拮抗作用(英文)（论文提纲范文）
（1）Fto介导的脂质微环境通过调节腺苷代谢调控成体神经发生（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略词和术语表 |
| 第一部分 FTO条件敲除造成海马区脂代谢异常 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 实验结论 |
| 第二部分 FTO条件敲除对学习记忆和成体神经发生的影响 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 脂代谢异常造成成体神经干细胞凋亡增加 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第四部分 FTO影响神经干细胞的机制研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 全文总结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 腺苷在神经系统中的作用 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在学习期间所取得的科研成果 |
（2）苦茶碱的分离制备以及对谷氨酸诱导的HT22细胞损伤的保护作用（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 茶叶嘌呤生物碱的提取和分离 |
| 1.1.1 超声波法 |
| 1.1.2 超临界CO_2萃取法 |
| 1.1.3 微波法 |
| 1.1.4 色谱分离法 |
| 1.2 苦茶碱的生理功效 |
| 1.2.1 镇静催眠 |
| 1.2.2 抗抑郁 |
| 1.2.3 消炎镇痛 |
| 1.2.4 抗帕金森病作用 |
| 1.2.5 对脂质代谢的作用 |
| 1.2.6 其它功效 |
| 1.3 谷氨酸的神经毒性研究 |
| 1.3.1 谷氨酸受体 |
| 1.3.2 谷氨酸转运体 |
| 1.3.3 谷氨酸诱导神经毒性的机制研究 |
| 1.4 研究的目的、意义及主要内容 |
| 第二章 苦茶碱的提取与分离研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料和仪器设备 |
| 2.2.1 实验材料和试剂 |
| 2.2.2 主要仪器设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 苦茶总生物碱的分离纯化 |
| 2.3.2 制备色谱条件优化 |
| 2.3.3 HPLC分析 |
| 2.4 结果与分析 |
| 2.4.1 苦茶总生物碱的分离纯化 |
| 2.4.2 制备色谱分离条件的筛选 |
| 2.5 讨论 |
| 第三章 苦茶碱和A_(2A)受体拮抗剂SCH58261 对谷氨酸损伤HT22 细胞活性的影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与设备 |
| 3.2.1 实验细胞系 |
| 3.2.2 主要试剂及配制方法 |
| 3.2.3 相关仪器与设备 |
| 3.3 HT22细胞培养、传代、冻存、复苏及计数 |
| 3.3.1 HT22细胞培养和传代 |
| 3.3.2 HT22细胞冻存 |
| 3.3.3 HT22细胞复苏 |
| 3.3.4 HT22细胞计数 |
| 3.4 实验方法 |
| 3.4.1 不同浓度谷氨酸、苦茶碱、SCH58261分别处理HT22细胞 |
| 3.4.2 不同浓度苦茶碱和SCH58261对谷氨酸诱导的HT22细胞损伤的影响 |
| 3.4.3 MTT实验方法 |
| 3.5 结果与分析 |
| 3.5.1 不同浓度谷氨酸对HT22细胞形态和存活率的影响 |
| 3.5.2 不同浓度苦茶碱对HT22细胞形态和存活率的影响 |
| 3.5.3 不同浓度SCH58261对HT22细胞形态和存活率的影响 |
| 3.5.4 不同浓度苦茶碱对谷氨酸诱导的HT22细胞损伤作用的影响 |
| 3.5.5 不同浓度SCH58261对谷氨酸诱导的HT22细胞损伤作用的影响 |
| 3.6 讨论 |
| 第四章 苦茶碱对谷氨酸诱导的HT22细胞氧化应激的影响 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料与设备 |
| 4.2.1 实验细胞系 |
| 4.2.2 主要试剂及配制方法 |
| 4.2.3 相关仪器与设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 样品前处理 |
| 4.3.2 SOD活力的测定 |
| 4.3.3 MDA含量的测定 |
| 4.3.4 考马斯亮蓝试剂盒测定蛋白浓度 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 苦茶碱对谷氨酸诱导HT22细胞损伤SOD活力的影响 |
| 4.4.2 苦茶碱对谷氨酸诱导HT22细胞损伤MDA含量的影响 |
| 4.5 讨论 |
| 第五章 苦茶碱对谷氨酸诱导的HT22细胞凋亡的影响 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 实验材料与设备 |
| 5.2.1 实验细胞系 |
| 5.2.2 主要试剂及配制方法 |
| 5.2.3 相关仪器与设备 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 Hoechst33342染色 |
| 5.3.2 流式Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率 |
| 5.4 结果与分析 |
| 5.4.1 Hoechst33342染色后HT22 细胞的形态学变化 |
| 5.4.2 流式Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率 |
| 5.5 讨论 |
| 第六章 结论和展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 创新 |
| 6.3 展望 |
| 参考文献 |
（3）丙戊酸对大鼠臂丛神经根性撕脱伤后脊髓运动神经元保护作用及其分子机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 综述 |
| 第1节 臂丛神经损伤的机制及治疗方法 |
| 1 臂丛神经损伤机制 |
| 2 臂丛神经损伤分类 |
| 3 臂丛神经根性撕脱伤治疗方法 |
| 3.1 臂丛神经节前损伤 |
| 3.2 臂丛神经节后损伤 |
| 3.3 电生理检测技术（EMG） |
| 3.4 组织工程 |
| 4 臂丛神经损伤后的并发症 |
| 4.1 灼性神经痛 |
| 4.2 疼痛性神经瘤 |
| 第2节 轴突损伤对运动神经元的影响 |
| 1 轴突损伤对运动神经元的影响 |
| 1.1 轴突切断后神经元形态、功能和生化变化 |
| 1.2 轴突切断后神经元存活的影响因素 |
| 2 轴突对损伤的反应 |
| 2.1 轴突切断后分子转运变化 |
| 2.2 轴突损伤后的变性 |
| 3 神经胶质细胞的反应 |
| 3.1 神经胶质细胞对中枢神经系统再生的影响 |
| 3.2 引起星形胶质细胞化及抑制性分子增加的原因 |
| 4 中枢神经损伤后炎症反应的作用 |
| 5 神经的轴突再生 |
| 5.1 内在因素对神经轴突再生的影响 |
| 5.2 神经轴突再生的外在因素 |
| 第3节 细胞凋亡及其信号传导途径 |
| 1 凋亡受体介导的凋亡途径 |
| 2 内质网介导的细胞凋亡途径 |
| 3 线粒体介导的细胞凋亡途径 |
| 4 Anoikis 介导的细胞凋亡途径 |
| 5 粒酶 B（granzymes B, GrB）介导的细胞凋亡途径 |
| 6 胱天蛋白酶的级联反应 |
| 第4节 c-Jun 及其信号传导途径 |
| l c-jun 与其他转录因子之间的相互作用 |
| 1.1 c-jun 与 JunB 的相互作用 |
| 1.2 TNF-α对 c-Jun 的调节作用 |
| 1.3 c-Jun 与 PU.1 的协同激活作用 |
| 2 AP-1 家族在疾病发生、发展中的联系 |
| 2.1 AP-1 与神经系统 |
| 2.2 AP-1 与骨骼系统 |
| 2.3 AP-1 与生殖系统 |
| 2.4 AP-1 与肌肉 |
| 2.5 AP-1 与血液、消化系统 |
| 第5节 Bcl-2 及其信号传导途径 |
| 1 Bcl-2 调节线粒体和内质网中的钙离子平衡 |
| 2 Bcl-2 抑制线粒体释放细胞色素 C |
| 3 Bcl-2 抑制第二种线粒体来源的激活剂/低等电点 IAP 结合蛋白28 |
| 4 Bcl-2 与神经细胞的凋亡 |
| 参考文献 |
| 第1章 改良全臂丛神经根性撕脱伤动物模型的建立 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器与试剂 |
| 2.2 实验动物 |
| 2.3 手术过程 |
| 2.4 取材 |
| 2.5 硫堇染色方法 |
| 2.6 透射电镜检查 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 手术显微镜下模型建立成功鉴定结果 |
| 3.2 硫堇染色结果 |
| 3.3 透射电镜观察结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 第2章 丙戊酸对臂丛神经根性撕脱伤后运动神经元保护作用的研究 |
| 1 前言 |
| 2 主要仪器及试剂 |
| 3 方法 |
| 3.1 硫堇染色方法 |
| 3.2 凋亡细胞 TUNEL 法检测 |
| 3.3 运动神经元及胶质细胞透射电镜检查 |
| 4 统计学分析 |
| 5 实验结果 |
| 5.1 硫堇染色实验结果 |
| 5.2 TUNEL 实验结果 |
| 5.3 透射电镜观察结果 |
| 6 讨论 |
| 6.1 臂丛神经根可导致脊髓运输神经元大量死亡 |
| 6.2 运动神经元死亡类型 |
| 6.3 神经胶质细胞与神经元的存活及再生 |
| 6.4 应用丙戊酸保护损伤后运动神经元的优点 |
| 6.5 脊髓运动神经元的存活对臂丛神经根性撕脱伤后功能恢复的影响 |
| 7 结论 |
| 8 参考文献 |
| 第3章 丙戊酸对臂丛神经撕脱伤后神经保护作用的分子机制研究 |
| 1 前言 |
| 2 主要仪器及试剂 |
| 3 方法 |
| 3.1 免疫组织化学染色 |
| 3.2 Western blot 检测 |
| 3.3 实时荧光定量 PCR 检测 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 免疫组织化学实验结果 |
| 4.2 Western blot 实验结果 |
| 4.3 实时荧光定量 PCR 结果 |
| 5 讨论 |
| 5.1 VPA 对 c-Jun mRNA 及蛋白表达的影响 |
| 5.2 VPA 对 Bcl-2 mRNA 及蛋白表达的影响 |
| 6 结论 |
| 7 参考文献 |
| 全文总结 |
| 作者简介与在读期间科研及发表论文情况 |
| 致谢 |
（4）咖啡因对p53野生型RT4膀胱癌细胞DNA损伤反应影响的机理研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 研究背景 |
| 参考文献 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 目录 |
| 第一部分 研究咖啡因(caffeine)对p53野生型RT4膀胱癌细胞凋亡的影响 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 材料和方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 1.6 参考文献 |
| 第二部分 研究咖啡因(caffeine)对p53野生型RT4膀胱癌细胞周期的影响 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 2.6 参考文献 |
| 第三部分 探讨咖啡因(caffeine)影响p53野生型RT4膀胱癌细胞的DNA损伤反应机制 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 3.6 参考文献 |
| 第四部分 咖啡因(caffeine)对P53野生型RT4膀胱癌在裸鼠体内影响的研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 结论 |
| 4.6 参考文献 |
| 全文研究总结 |
| 综述一 |
| 参考文献 |
| 综述二 |
| 参考文献 |
| 作者简历以及在学期间取得的科研成果 |
（5）嘌呤核苷酸补偿对海洛因依赖大鼠 5-羟色胺神经系统的生物学效应研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩写词表 |
| 综述 |
| 综述1 |
| 1 阿片类药物概述 |
| 2 药物滥用和药物依赖 |
| 2.1 生理依赖性 |
| 2.2 精神依赖性 |
| 2.3 药物耐受性和药物成瘾 |
| 3 阿片类药物依赖性机制的研究 |
| 3.1 阿片受体 |
| 3.2 内源性阿片样肽 |
| 3.3 神经递质与阿片类药物依赖 |
| 综述2 |
| 1 细胞凋亡 |
| 1.1 细胞凋亡的概念 |
| 1.2 细胞凋亡的途径 |
| 2 药物滥用与细胞凋亡 |
| 2.1 可卡因与细胞凋亡 |
| 2.2 阿片类与细胞凋亡 |
| 立题依据 |
| 第1篇 嘌呤核苷酸补偿对海洛因依赖大鼠5-羟色胺神经系统影响的体内研究 |
| 第1章 海洛因依赖动物模型的建立 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第2章 海洛因及嘌呤核苷酸补偿对大鼠脑组织中5-HT及5-HIAA含量的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第3章 海洛因及嘌呤核苷酸补偿对大鼠脑组织中色氨酸羟化酶表达的影响 |
| 第1节 海洛因及嘌呤核苷酸补偿对大鼠脑组织中色氨酸羟化酶含量的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 第2节 海洛因及嘌呤核苷酸补偿对大鼠脑组织中色氨酸羟化酶表达的免疫组织 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 第3节 海洛因及嘌呤核苷酸补偿对大鼠脑组织中色氨酸羟化酶基因mRNA水平的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第4章 海洛因及嘌呤核苷酸补偿对大鼠脑组织中嘌呤核苷酸含量及GTP环水解酶 Ⅰ基因MRNA水平的影响 |
| 第1节 海洛因及嘌呤核苷酸补偿对大鼠脑组织中嘌呤核苷酸含量的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 第2节 海洛因及嘌呤核苷酸补偿对大鼠脑组织中GTP环水解酶Ⅰ基因mRNA水平的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第5章 海洛因及嘌呤核苷酸补偿对大鼠脑组织超微结构的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第6章 海洛因及嘌呤核苷酸补偿对大鼠脑组织中胶质纤维酸性蛋白表达的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第7章 海洛因及嘌呤核苷酸补偿对大鼠脑组织中CASPASE-3表达的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第2篇 海洛因及嘌呤核苷酸对大鼠C6神经胶质瘤细胞影响的体外研究 |
| 第1章 海洛因及嘌呤核苷酸对C6神经胶质瘤细胞增殖的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第2章 海洛因及嘌呤核苷酸对C6神经胶质瘤细胞CASPASE-3表达的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 课题创新性 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（6）c-jun对仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌影响的机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 原癌基因的研究概况 |
| 1.1.1 原癌基因(proto-onco gene) |
| 1.1.2 即刻早期基因(immediate-early gene,IEG) |
| 1.1.3 编码核内蛋白的原癌基因 |
| 1.1.4 转录因子(transcription factors)与细胞基因调控 |
| 1.1.5 碱性亮氨酸拉链bZIP(basic leucine zipper)家族中的转录因子AP-1(activated protein 1)家族 |
| 1.2 原癌基因c-jun的生物学特性 |
| 1.2.1 原癌基因c-jun的结构与功能 |
| 1.2.2 c-jun表达的活性调控 |
| 1.2.3 c-Jun蛋白的磷酸化 |
| 1.2.4 Jun-Fos异源二聚体的形成 |
| 1.2.5 Jun/Fos与转录因子AP-1 |
| 1.2.6 c-jun家族在细胞致癌中的作用 |
| 1.3 原癌基因c-jun与细胞之间的关系 |
| 1.3.1 原癌基因c-jun与细胞增殖和转化 |
| 1.3.2 原癌基因c-jun与细胞分化 |
| 1.3.3 原癌基因c-jun与细胞凋亡 |
| 1.4 原癌基因c-jun在不同组织器官中的表达及与疾病的关系 |
| 1.4.1 原癌基因c-jun与中枢神经系统 |
| 1.4.2 原癌基因c-jun与心血管系统 |
| 1.4.3 原癌基因c-jun与炎症性疾病 |
| 1.4.4 原癌基因c-jun与肿瘤和癌症 |
| 1.5 原癌基因c-jun与生殖的关系 |
| 1.5.1 c-jun对雄性生殖的影响 |
| 1.5.2 c-jun对雌性生殖的影响 |
| 1.6 一些外部因素影响后的原癌基因c-jun变化 |
| 第二章 引言 |
| 2.1 研究的背景和意义 |
| 2.2 主要研究内容 |
| 2.2.1 c-jun在荣昌仔猪睾丸组织中的表达及与睾酮分泌的关系 |
| 2.2.2 c-jun对离体培养仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的影响 |
| 2.2.3 c-jun调节hCG诱导荣昌仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的作用机制 |
| 2.3 研究的技术路线 |
| 第三章 c-jun在仔猪睾丸组织中的表达及与睾酮分泌的关系 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.1.3 数据处理及统计学分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 不同日龄荣昌仔猪睾丸组织结构的变化 |
| 3.2.2 总RNA的纯度和完整性鉴定 |
| 3.2.3 扩增曲线与溶解曲线 |
| 3.2.4 比较目的基因和参照基因的扩增效率 |
| 3.2.5 仔猪睾丸组织中c-jun mRNA的表达分析 |
| 3.2.6 不同时期荣昌仔猪血浆睾酮水平 |
| 3.3 讨论 |
| 第四章 c-jun对体外培养仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的影响 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 主要试剂 |
| 4.1.2 试验动物 |
| 4.1.3 仪器设备 |
| 4.1.4 试验方法 |
| 4.1.5 检测方法 |
| 4.1.6 统计学分析 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 体外培养仔猪睾丸间质细胞的功能 |
| 4.2.2 不同浓度c-jun ASODNs对仔猪间质细胞增殖的影响 |
| 4.2.3 不同浓度c-jun ASODNs对仔猪间质细胞凋亡的影响 |
| 4.2.4 不同浓度c-jun ASODNs对基础状态下仔猪间质细胞睾酮分泌的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 体外培养的间质细胞的反应性 |
| 4.3.2 鉴定间质细胞的标志—3β-HSD |
| 4.3.3 c-jun对仔猪睾丸间质细胞增殖的影响 |
| 4.3.4 c-jun对仔猪睾丸问质细胞凋亡的影响 |
| 4.3.5 c-jun对仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的影响 |
| 第五章 c-jun调节hCG诱导仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的作用机制 |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.1.1 主要试剂 |
| 5.1.2 主要仪器 |
| 5.1.3 试验动物 |
| 5.1.4 试验方法 |
| 5.1.5 统计学分析 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 不同浓度c-jun ASODNs对hCG诱导仔猪睾丸间质细胞的睾酮分泌的影响 |
| 5.2.2 cAMP对c-jun调节睾丸间质细胞分泌睾酮的影响 |
| 5.2.3 维拉帕米对c-jun调节hCG诱导睾丸间质细胞分泌睾酮的影响 |
| 5.3 讨论与结论 |
| 第六章 综合与小结 |
| 论文的创新点 |
| 主要参考文献 |
| 缩略词表 |
| 博士在校期间发表的论文及参加的课题情况 |
| 致谢 |
（7）茶叶嘌呤生物碱抗抑郁作用及其机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 目录 |
| 1 绪论 |
| 1.1 茶叶的历史与分类 |
| 1.2 茶叶嘌呤生物碱的化学成分及分布 |
| 1.3 茶叶嘌呤生物碱的合成与代谢 |
| 1.4 茶叶嘌呤生物碱分析检测及生物转化的主要方法与技术 |
| 1.5 茶叶嘌呤生物碱的提取与分离 |
| 1.6 茶叶嘌呤生物碱的生物活性及作用机制 |
| 1.7 抑郁及抗抑郁药研究简介 |
| 1.8 立题依据与主要研究内容 |
| 2 TC的提取与分离研究 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 3 茶叶嘌呤生物碱对抑郁行为学的影响 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 4 茶叶嘌呤生物碱对CUMS大鼠脑组织单胺类神经递质的影响 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 5 茶叶嘌呤生物碱对氯离子通道的影响 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.4 讨论 |
| 6 茶叶嘌呤生物碱对PDE4活性的影 |
| 6.1 实验材料 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.3 实验结果 |
| 6.4 讨论 |
| 7 茶叶嘌呤生物碱对抑郁信号通路的影响 |
| 7.1 实验材料 |
| 7.2 实验方法 |
| 7.3 实验结果 |
| 7.4 讨论 |
| 8 总结与展望 |
| 8.1 总结 |
| 8.2 创新与突破 |
| 8.3 前景与展望 |
| 参考文献 |
| 附录1 在读博士期间的学术成果及科研工作 |
| 附录2 TC结构鉴定数据 |
| 附录3 论文涉及的基因序列 |
| 缩略语说明 |
| 图表索引 |
| 致谢 |
（8）大鼠骨髓间充质干细胞侧脑室植入对SAH后CVS大鼠的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 研究论文 大鼠骨髓间充质干细胞侧脑室植入对 SAH 后 CVS 大鼠的影响 |
| 引言 |
| 第一部分 大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养、鉴定及神经元条件培养基对其定向诱导分化 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 大鼠SAH 后CVS 模型制备及行为学、生物学指标测定 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 BrdU标记的BMSCs侧脑室植入后对SAH后CVS大鼠行为学影响的研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 SAH 后CVS 大鼠移植BMSCs 后海马神经元凋亡的研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第五部分 SAH 后 CVS 大鼠 DMEM 植入前后脑血管的超微结构观察与血中 NOS、ET-1 含量变化 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述一 脑血管痉挛发病原因的分子机制研究现状 |
| 综述二 动脉瘤性蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的预防和治疗进展 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）腺苷A2A受体基因敲除对慢性低灌注白质损伤的影响及其与炎性效应调控的关系（论文提纲范文）
| 英文缩写一览表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 论文正文 腺苷A_(2A)受体基因敲除对慢性低灌注白质损伤的影响及其与炎性效应调控的关系 |
| 前言 |
| 第一部分 小鼠慢性脑血流低灌注模型的建立和评价 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 腺苷A_(2A)受体基因敲除对慢性低灌注白质损伤的影响及其与炎性效应调控的关系 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第三部分 骨髓来源细胞A_(2A)受体对慢性低灌注白质损伤的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 全文结论 |
| 致谢 |
| 图片 |
| 参考文献 |
| 文献综述 腺苷A_(2A)受体在神经系统表达及功能的研究进展 |
| 参考文献 |
| 博士期间发表的与课题相关的文章 |
| 英文论着 |
（10）黄角颗粒抗缺氧缺血神经元细胞凋亡作用的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文对照缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 黄角颗粒对实验性局灶性脑梗死大鼠神经功能缺损及脑组织形态变化的影响 |
| 实验一 黄角颗粒对实验性局灶性脑梗死大鼠神经功能缺损的影响 |
| 实验二 黄角颗粒对实验性局灶性脑梗死大鼠脑组织形态学变化的影响 |
| 第二部分 黄角颗粒对实验性局灶性脑梗死大鼠caspase依赖的线粒体内源性凋亡途径的影响 |
| 实验三 黄角颗粒对实验性局灶性脑梗死大鼠脑原位细胞凋亡的影响 |
| 实验四 黄角颗粒对实验性局灶性脑梗死大鼠神经细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达水平的影响 |
| 第三部分 黄角颗粒对拟缺血诱导的神经细胞非caspases介导的AIF凋亡途径的影响 |
| 实验五 黄角颗粒含药血清对缺氧缺血神经元细胞凋亡诱导因子AIF诱导的核转位的影响 |
| 第四部分 理论探讨 |
| 1 对中风病病因病机的认识 |
| 2 黄角颗粒治疗中风的理论探讨 |
| 3 黄角颗粒抗缺氧缺血神经元细胞凋亡作用探讨 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述(一)中医学对脑梗死的认识 |
| 综述(二)细胞凋亡研究进展 |
| 在研期间发表论文论着及主持科研课题 |
| 致谢 |
四、咖啡因对LY294002诱导的小脑颗粒神经元凋亡的拮抗作用(英文)（论文参考文献）
- [1]Fto介导的脂质微环境通过调节腺苷代谢调控成体神经发生[D]. 高慧. 浙江大学, 2020(01)
- [2]苦茶碱的分离制备以及对谷氨酸诱导的HT22细胞损伤的保护作用[D]. 陈书清. 浙江大学, 2018(05)
- [3]丙戊酸对大鼠臂丛神经根性撕脱伤后脊髓运动神经元保护作用及其分子机制研究[D]. 吴殿秀. 吉林大学, 2013(08)
- [4]咖啡因对p53野生型RT4膀胱癌细胞DNA损伤反应影响的机理研究[D]. 汪超军. 浙江大学, 2012(12)
- [5]嘌呤核苷酸补偿对海洛因依赖大鼠 5-羟色胺神经系统的生物学效应研究[D]. 李鸿梅. 吉林大学, 2011(09)
- [6]c-jun对仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌影响的机理研究[D]. 郑小波. 西南大学, 2010(05)
- [7]茶叶嘌呤生物碱抗抑郁作用及其机制的研究[D]. 谢果. 暨南大学, 2010(09)
- [8]大鼠骨髓间充质干细胞侧脑室植入对SAH后CVS大鼠的影响[D]. 李朝晖. 河北医科大学, 2010(01)
- [9]腺苷A2A受体基因敲除对慢性低灌注白质损伤的影响及其与炎性效应调控的关系[D]. 段炜. 第三军医大学, 2009(05)
- [10]黄角颗粒抗缺氧缺血神经元细胞凋亡作用的实验研究[D]. 陈国华. 湖北中医学院, 2008(10)