一、雌二醇对去势沙鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织中NO和NOS的影响（论文文献综述）
高波[1]（2015）在《GPER1介导的雌激素非基因组效应发挥全脑缺血神经元保护作用的在体实验研究》文中提出缺血性脑血管病（ICVD）约占全部脑血管病的8%,属于神经科常见病和多发病,是威胁人类尤其是中老年人健康与生存的主要疾病之一。在我国,随着生活水平的提高,高血压、糖尿病患者的增多,缺血性脑卒中的发病率逐年增加,以每年9%的速度快速上升,病死率高达60%-80%,总人数已大大高于美、加、法、日、瑞士等国,发病率和死亡率均居世界前列。缺血性脑血中风患者即使存活,也会不可避免地留有后遗症,严重影响生活质量,成为家庭乃至社会沉重的负担。因此加强脑缺血再灌注后的保护性药物治疗研究将具有重大的现实意义。神经保护剂对于降低脑卒中的发病率、死亡率和致残率具有十分重要的意义。目前,无论是流行病学调查还是动物实验,均提示雌激素对脑缺血后神经元有保护作用。流行病学调查发现:性别不同,脑中风、心血管疾病的发生率及预后存在显着的差异。与同龄男性相比,女性绝经前高血压、脑中风、心肌缺血等发病率较低,绝经后的女性与同年龄阶段的男性相比,脑卒中发病率更高和预后更差;动物实验证实:无论是长期预防性给予生理剂量的雌激素还是脑缺血后即刻给予雌激素均能减少由于局部缺血造成的脑梗塞面积或全脑缺血造成的海马细胞损伤。雌激素的神经保护机制涉及多方面机制。由于雌激素是一种性激素,其激素效应在体内许多生理和病理过程中均起着重要的角色,临床运用雌激素作为神经保护剂将会带来很多副作用,例如:增加绝经女性患乳腺癌和生殖系统癌症的风险。因此,雌激素作为神经保护剂运用于临床存在广泛争议,这些争议的解决必须依赖我们对雌激素和雌激素神经保护机制的清楚认识。本研究共分为四部分实验。实验一的第一部分首先切除正常雌性大鼠的双侧卵巢进行去势,术后第1、3、5、7天采用剪尾采血法采取血液,应用电化学法检测去势SD大鼠血清E2浓度变化。通过术后1、3、5、7天的浓度变化曲线可以看出,与假手术组比,大部分动物在卵巢去势后血清E2浓度迅速下降,术后5天血清E2浓度下降近75%,术后7天时浓度均低于5pg/ml,根据血清检测结果可以确定卵巢去势是否完全,血清E2浓度可以作为卵巢去势模型是否成功的纳入标准。为了保证涉雌激素实验研究结果的可靠性,卵巢去势成功是建立可控的、恒定的E2水平的动物模型的基础。实验一第二部分应用免疫化学组织染色进行了GPER1在去势大鼠海马区神经元定位的研究,染色结果发现GPER1在大鼠海马区神经元有广泛的分布,GPER1蛋白免疫反应阳性在CA1-3区和齿状回神经元细胞膜上均呈现,表明GPER1定位在细胞膜上。实验二进行了四脑血管阻断全脑缺血模型建立的研究。应用显微外科技术和脑电监测持技术,以出现静息脑电图为判断标准进行模型的建立,72h后海马尼氏染色结果显示CA1区损伤严重,神经元出现大部分死亡,正常结构破坏,锥体细胞明显减少,排列紊乱,变性的锥体细胞核固缩,尼氏体大量脱失,尼氏染色变淡,仅残存极少量形态相对完好的神经元,证明了建模成功。保证了后继干预实验的顺利进行。实验三是关于G-1激活GPER1后对大鼠全脑缺血缺氧后海马的形态学及行为学保护的研究。在卵巢去势和四脑血管阻断全脑缺血缺氧的建模基础上,在缺血前后不同时间点注入不同剂量的G-1溶液,观察了各组缺血再灌注72h后的海马CA1区尼氏染色结果。7天后进行了各组的Morris水迷宫测试,以上结果为GPER1激活对海马神经元的保护作用提供了形态学和行为学证据。目前研究证明了G-1对全脑缺血后海马CA1区神经元损伤的保护作用具有时间和浓度依赖性,G-1能够减轻全脑缺血造成的认知功能障碍。实验四我们进行了GPER1激活对全脑缺血大鼠海马神经元损伤的保护机制研究。运用western blot技术检测了假手术组、缺血+空白对照组、缺血+G1（50μg,-1h）组缺血再灌注后1h、4h、12h各组及各时间点p-Akt、p-ASK1、p-JNK三种蛋白的表达水平,还检测了假手术组、缺血+G1（50μg,-1h）组、缺血+G1（50μg,-1h）+LY294002组缺血再灌注1h后p-Akt、p-ASK1、p-JNK蛋白的表达水平,实验结果发现GPER1激活明显提高缺血后1h海马CA1区p-Akt的水平,降低p-ASK1和p-JNK的水平,应用G-1后可以进一步提高p-Akt的水平和进一步降低p-ASK1和p-JNK的水平,G-1的这种效果可以被LY294002所阻断,这些结果证明了G-1通过PI3K/Akt的激活下调ASK1/JNK的活性能够有效保护全脑缺血对海马神经元造成的损伤,改善全脑缺血造成的认知功能障碍,预示着GPER1的激活在全脑缺血后有神经保护作用,可能成为脑缺血后药物的潜在治疗靶点。
黄志华[2]（2014）在《葛根有效成分结构修饰体—染料木素磺酸钠对脑缺血的保护及机制研究》文中提出目的：在中医学理论的指导下,应用现代生物医学技术,从氧化应激、能量代谢、兴奋性毒性损伤、炎症反应、细胞凋亡等多角度,研究葛根有效成分结构改造物——染料木素磺酸钠（genistein sodium sulfonate, GSS）对脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制。为进一步拓展葛根的药理作用提供理论和实践依据。方法：采用大鼠在脑中动脉栓塞动物模型、谷氨酸损伤PC12细胞及原代培养的皮层神经元细胞模型,运用神经功能学评分、TTC染色、酶活性分析检测技术、放射免疫学方法、ELISA、MTT:方法、流式细胞术、Western blot等多种研究方法,分别从离体和在体水平研究GSS对脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制。结果：（1）MCAO再灌注模型组大鼠均出现不同程度的神经功能损伤和脑梗死,血清LDH及CK活性升高,缺血侧脑组织LDH活性降低;GSS治疗后,神经功能评分降低,脑梗死体积缩小,血清LDH及CK活性降低,缺血侧脑组织LDH活性升高。（2）MCAO模型大鼠缺血侧脑组织SOD、GSH-Px、CAT、tNOS、cNOS活性降低,T-AOCP争低,iNOS活性升高,NO含量降低,MDA含量升高; GSS治疗后,大鼠缺血侧脑组织SOD、GSH-Px、CAT、tNOS、cNOS活性升高,T-AOC升高,iNOS活性降低,NO含量升高,MDA含量降低。（3）MCAO模型大鼠缺血侧脑组织钠钾ATPase及钙镁ATPase活性降低;GSS治疗后,大鼠缺血侧脑组织钠钾ATPase及钙镁ATPase活性升高。（4）谷氨酸损伤组PC12细胞活性降低,GSS处理后,PC12细胞活性升高。（5）正常组原代皮层神经元细胞折光性好,胞体饱满,有较多树突生成;GSS对正常皮层神经元形态及LDH释放率无明显影响;谷氨酸损伤模型组细胞折光性差,胞体饱满性差,树突减少,LDH释放率升高；GSS处理谷氨酸损伤细胞较单纯模型组细胞状态明显好转,表现为细胞折光性较好,胞体较饱满,树突较多,LDH释放率降低。（6）MCAO大鼠海马组织NMDA受体GluN2B蛋白表达升高,GSS治疗后,海马组织GluN2B蛋白表达降低。（7）MCAO模型组大鼠血清MPO、IL-6、TNF-α水平升高,IL-10水平降低,缺血侧脑组织IL-10含量降低,脑组织皮层半损伤区及海马IL-10和IL-10R蛋白（8）MCAO模型组大鼠脑组织皮层半损伤区Bax、Caspase-3及Caspase-.9蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低;GSS治疗后,皮层半损伤区Bax Caspase-3及Caspase-9蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高。（9）谷氨酸损伤模型组细胞出现较多的凋亡细胞,Bax及Caspase-3表达升高,Bcl-2表达降低；GSS处理后,凋亡细胞减少,BaX及Caspase-3表达降低,Bcl-2表达升高。（10）MCAO模型组大鼠脑组织皮层半损伤区及海马DREAM蛋白表达降低;GSS治疗后,DREAM蛋白表达升高。结论：（1）GSS对脑缺血再灌注损伤具有保护作用；（2）GSS可通过提高机体的抗氧化能力,减轻氧化应激损伤,升高ATP酶的活性,改善脑细胞能量代谢障碍,抑制炎症反应,调控NMDA受体的表达及活化抑制兴奋性毒性损伤,减少细胞凋亡对脑缺血再灌注损伤起保护·作用;（3）DREAM可能在GSS的脑保护效应中起关键作用。
汪兴宇[3]（2014）在《丹参、川芎有效部位配伍及参芎注射液对脑缺血再灌注损伤的保护作用研究》文中研究表明目的通过对丹参和川芎有效部位配伍对脑缺血再灌注损伤大鼠保护作用的研究,探索丹参和川芎有效部位配伍对脑缺血再灌注损伤的作用情况。并以参芎注射液作为丹参和川芎配伍的一个实例,研究对脑缺血再灌注损伤的保护作用机制,探索其防治脑缺血的作用机理,为进一步的临床应用提供参考。方法（1）采用正交设计法L9（34）组成丹参、川考四种主要有效部位（丹参总酚酸、丹参总酮、川芎生物碱、川弯有机酸）不同剂量配比的9个组合,将体重260-280g左右的雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和9个组方组,连续给药三天后造脑缺血-再灌注模型,分别于再灌注5min、30min、60min、120min、180min、240min取血样,测定血液中MDA含量和SOD活力。再灌注24h,考察神经功能评分并取脑组织,对脑组织中的MDA和SOD进行测定,用RT-PCR法对脑组织中的基质金属蛋白酶-9（MMP-9）基因进行检测。（2）SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫通组、参芎注射液高、中、低剂量组。采用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,考察参芎注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能评分、脑梗死体积的影响;检测脑组织中一氧化氮合酶（NOS）、一氧化氮（NO）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）的含量,ELISA法检测对脑组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）水平的影响;采用RT-PCR法测定大鼠脑组织IL-1β和TNF-α mRNA的表达。结果（1）丹参、川芎主要有效部位配伍药效学研究:①丹参、川芎有效部位配伍的9个组方灌胃后,脑缺血再灌注大鼠各时间点血液中的SOD活力均有所增加,MDA含量均有所降低。再灌注5min,SOD活力增强通常不明显,MDA含量的降低也不是很明显。再灌注30min后,与模型组同时间点比较,开始陆续出现较显着的效果（P<0.05）。②再灌注24h,各配伍组与模型组比较,脑中的SOD活力显着增强,MDA含量显着降低（P<0.05）。③再灌注24h,各配伍组均能不同程度减少基质金属蛋白酶-9（MMP-9）mRNA的含量,其中2、7、9号组方差异具有显着性意义（P<0.05）,1、4、8号组方与模型组相比差异有极显着性意义（P<0.01）。（2）参芎注射液药效学研究:①与模型组比较,参芎注射液各剂量组均能显着减小脑梗死体积,改善神经行为学评分（P<0.05）,其中高剂量组的效果更为明显（P<0.01）。②参芎注射液各剂量组均能显着降低MCAO大鼠脑组织中降低MCAO大鼠脑组织中MDA、NO的含量,降低LDH、NOS的活性,提高SOD的活性（P<0.05）,其中高、中剂量组的效果尤为显着（P<0.01）。③参芎注射液各剂量组均能显着降低MCAO大鼠脑组织中炎症因子IL-1β和TNF-α mRNA的表达,并对降低IL-1β和TNF-α在脑部的含量（P<0.05）,其中高剂量组的效果更为显着（P<0.01）。结论丹参、川芎四种有效部位（丹参总酚酸、丹参总酮、川芎有机酸、川芎生物碱）配伍组方对脑缺血损伤大鼠脑部和血液中的氧化损伤很好的抑制作用,并且能抑制脑部MMP-9的基因过度表达,对缓解脑水肿和改善神经损伤起到了关键性的作用。参芎注射液能减少氧化损伤和抑制炎症因子的表达是其抗MCAO大鼠缺血再灌注损伤的部分机制。
王瑞敏[4]（2013）在《低剂量Genistein诱导eNOS/Nrf2-ARE通路对缺血后神经元氧化应激损伤和空间学习记忆缺陷的保护作用》文中进行了进一步梳理目的：中风不仅是全球第二大主要死亡原因，而且已成为长期致残的首要病因之一。据统计每年新发中风病人约1600万，导致近600万人死亡。然而，目前尚未发现理想的治疗措施。缺血性脑损伤的病理过程极为复杂，其发病机制涉及脑组织能量代谢紊乱、兴奋性氨基酸毒性、自由基损伤、炎症反应等多环节。近些年来，氧化应激学说逐渐成为缺血性脑血管疾病的临床与基础研究的热点。染料木黄酮（Genistein，GEN）是从植物中提取的大豆异黄酮类物质，大量研究报道GEN具有抗氧化作用。本研究在大鼠全脑缺血后5min尾静脉注射低剂量GEN，采用形态学、分子生物学、行为学等实验技术观察其对缺血后锥体神经元的保护作用和对大鼠空间学习记忆的影响，并探索其可能的信号转导机制。为探索缺血性脑中风的药物靶点和有效治疗措施提供重要的理论基础和实验依据。方法：采用SD大鼠四动脉结扎全脑缺血模型，制备缺血再灌注5d的海马冠状冰冻切片，形态学（NeuN/Fluoro-Jade B、焦油紫染色、TUNEL染色等）实验技术观察海马CA1/3区神经元生存及损伤情况；制备缺血再灌注3d的海马冠状冰冻切片，采用免疫荧光双染或三染色技术观察激酶或蛋白的表达与亚细胞分布，观察海马CA1区神经元氧化应激损伤情况；制备海马CA1区总蛋白及胞浆、胞核组织蛋白匀浆液，采用westernblot技术进行激酶或蛋白如eNOS, p-eNOS, HSP90, Nrf2, HO-1的半定量分析，免疫共沉淀技术观察p-eNOS和HSP90的相互作用；生物素转换法观察Keap1的巯基亚硝基化（S-nitrosation）水平；TransAMTM试剂盒检测Nrf2的DNA结合活性；Morris Water Maze观察大鼠的空间学习记忆功能。结果：1. GEN （1mg/kg）通过增加eNOS-HSP90的相互作用减轻缺血后海马CA1区神经元损伤1) GEN显着降低全脑缺血诱导的迟发性神经元损伤。与sham组相比，溶剂对照组（缺血再灌注5d+溶剂对照）NeuN阳性细胞数显着减少，而TUNEL阳性细胞数显着增多；另外，缺血后给予GEN组海马CA1区NeuN染色阳性神经元数量较溶剂对照组显着增加，而凋亡样神经元明显减少；NOS抑制剂L-NAME可显着减弱GEN诱导的神经保护作用。2) GEN显着增加大鼠海马CA1区神经元eNOS磷酸化水平及HSP90蛋白的表达。Western blot结果显示，与缺血再灌注相同时间点相比，GEN组再灌注30min、1d和3d时间点p-eNOS水平显着升高；HSP90的蛋白表达于再灌注的后期（1d、3d）GEN组较缺血再灌注（ischemia/reperfusion，I/R）组显着升高。3) L-NAME显着抑制GEN诱导的p-eNOS水平和HSP90蛋白表达的升高，抑制了二者的相互结合。Western blot结果显示：与溶剂对照组相比（I/R3d+0.9%NaCl），缺血前30min给予1mg/kg L-NAME可显着降低GEN诱导的p-eNOS和HSP90水平的升高；共聚焦结果显示，与缺血再灌注3d组相比，GEN组p-eNOS免疫染色显着增强，主要分布在海马CA1区神经元的细胞浆，L-NAME显着废弃了此作用。与缺血再灌注组相比，GEN组p-eNOS和HSP90的免疫共结合显着升高，而L-NAME显着逆转了GEN的此作用，HSP90的蛋白表达在GEN组和L-NAME组并未发生显着变化。4)于大鼠缺血后7-9d实施Morris水迷宫，观察GEN和L-NAME对大鼠寻找水下平台的时间的影响。实验结果显示：sham组和GEN处理组大鼠的潜伏时间随着训练时间的延长而缩短，而I/R组和L-NAME处理组无显着差异，且均较GEN组显着延长。移走水下平台后，I/R组和L-NAME组大鼠在平台原有象限探索的时间较GEN组和sham大鼠探索的时间显着缩短。结果表明GEN可改善大鼠缺血后空间学习记忆缺陷。2.1mg/kg GEN通过上调eNOS活性促进Keap1巯基亚硝基化，激活Nrf2-HO-1抗氧化信号通路，减轻大鼠缺血后氧化应激损伤1) GEN显着增加Keap1巯基的亚硝基化。采用生物素不可逆转换方法观察GEN对缺血后大鼠海马CA1区神经元Keap1亚硝基化水平的影响。结果显示：GEN显着升高缺血后3d Keap1的亚硝基化水平，缺血前给予L-NAME可降低此作用；而Keap1的总蛋白和β-actin水平没有显着变化。另外，共聚焦结果显示海马CA1区GEN组亚硝基化总蛋白的免疫染色较I/R组和L-NAME组显着增强，而且主要定位在神经元的细胞浆。2) GEN增加了Nrf2的核转位。Western blot结果显示：在缺血再灌注组的后期（1d和3d）GEN显着增加了海马CA1区细胞核中Nrf2的蛋白水平，而其在细胞浆中的表达显着减少；激光共聚焦结果显示GEN组Nrf2和神经元核蛋白NeuN的免疫共定位较缺血再灌注组显着增强；L-NAME显着降低了GEN的此作用。3) GEN显着增加海马CA1区Nrf2的DNA结合活性。与缺血再灌注3d组相比，GEN处理组Nrf2的DNA结合活性显着升高，而缺血前给予L-NAME显着废弃了GEN的此作用。4) GEN显着增加海马CA1区Nrf2靶基因HO-1的蛋白表达。Westernblot分析显示：与缺血再灌注3d实验组相比，GEN显着增加了海马CA1区HO-1蛋白水平，而L-NAME降低了此作用。免疫荧光染色结果进一步证明，GEN增加了HO-1的荧光强度，其主要与细胞核荧光探针DAPI共定位，提示主要分布在CA1区神经元的细胞核中。5) GEN降低脑缺血诱导的氧化应激损伤。采用免疫荧光染色技术观察GEN对脂质过氧化物最终产物4-HNE及DNA氧化损伤的特异性产物8-OHdG水平的影响。结果发现，sham组和GEN处理组海马CA1区4-HNE和8-OHdG免疫荧光的强度较弱，而缺血再灌注3d实验组和L-NAME处理组海马CA1区神经元4-HNE和8-OHdG的免疫染色显着增强。3. GEN可通过诱导海马CA3区Nrf2信号通路调控其神经保护作用1) Keap1-tat小肽降低缺血后海马CA1区神经元损伤。焦油紫染色显示，与sham组相比缺血15min再灌注5d实验组和溶剂对照组海马CA1区神经元严重损伤，神经元密度降低；缺血前20min侧脑室注射Keap1-tat小肽（30，50，100μg）能显着增加海马CA1区生存的神经元数量，50μg剂量组生存的神经元数量最多，提示50μg为最佳剂量。2) Keap1-tat可显着改善大鼠缺血后空间学习记忆功能。缺血15min再灌注7-9d实施Morris水迷宫试验。结果发现，与sham组相比溶剂对照组和缺血再灌注组大鼠寻找安全平台的潜伏期明显延长，而keap1-tat处理组（50μg）大鼠寻找安全平台的潜伏期较溶剂对照组显着降低；移走安全平台后，与sham组相比，90s内溶剂对照组和缺血再灌注组大鼠于平台所在象限探索的时间明显缩短，而keap1-tat小肽组大鼠在此象限停留时间较溶剂对照组显着延长。3) Keap1-tat小肽未显着影响正常大鼠海马CA1区神经元的形态及大鼠的空间学习记忆功能。与sham组相比，脑室注射50μg keap1-tat小肽（sham+keap1-tat组）的正常大鼠海马CA1区神经元存活数量没有显着差异，而且两组大鼠的空间学习记忆功能无显着差异。4) Keap1-tat小肽能显着增加细胞核中Nrf2水平。与再灌注同一时间点（I/R）组相比，侧脑室注射50μg keap1-tat小肽组海马CA1区神经元细胞核中Nrf2表达均显着升高。Sham组与sham+keap1-tat组海马CA1区神经元细胞核中Nrf2表达无显着差异。5) Keap1-tat具有与GEN相同的神经保护作用。侧脑室（CA3区）微量注射0.4μg/μl （5μl） KA，于第8d焦油紫染色发现海马CA3区神经元大量损伤，而CA1区仅有少量神经元损伤。与单纯KA（0.4μg/μl）处理组相比，KA+Keap1-tat组海马CA3区大量神经元形态正常，少见损伤的神经元，CA1区生存的神经元数量两组无显着差异。缺血10min再灌注5（dI/R）+KA组与单纯KA处理组相似，海马CA3区神经元严重损伤，而CA1区神经元损伤不显着。与I/R+KA处理组相比，缺血前侧脑室注射（CA3区）Keap1-tat小肽后再灌注5d海马CA1和CA3区神经元均无显着损伤；有趣的是，KA+I/R+GEN组可见海马CA3和CA1区神经元严重损伤。结果提示，0.4μg/μl （5μl） KA特异损伤海马CA3区神经元；Keap1-tat可有效降低缺血后CA1区神经元损伤；KA可阻抑GEN对缺血后海马CA1区神经元的保护作用。6) Keap1-tat可诱导缺血后海马CA3区Nrf2的核转位，KA可降低此作用。免疫荧光双染色结果显示：缺血后再灌注1d时，CA3区给予Keap1-tat组Nrf2主要分布在神经元细胞核中，胞浆中分布较少；而KA+I/R+GEN处理组Nrf2除主要分布在胞浆外，在细胞核周围及核内也有较少分布。在缺血再灌注3d时，Keap1-tat组Nrf2几乎完全分布在细胞核中；KA+I/R+GEN组Nrf2几乎完全分布在细胞浆中。结果提示，在Keap1-tat处理组Nrf2可能随再灌注时间的延长发生了核转位，而KA阻断了此作用。结论：缺血再灌注后给予低剂量GEN可通过上调eNOS-HSP90信号保护海马CA1区神经元，改善缺血后大鼠的空间学习和记忆功能；其分子机制可能是通过Keap1的亚硝基化诱导了Nrf2-HO-1抗氧化信号通路；海马CA3区Nrf2信号可能参与了GEN诱导神经保护作用的调控。我们的研究为临床探索治疗缺血性脑中风的药物研发提供了重要靶点，为临床防治中风的策略提供理论依据。
孙琳[5]（2011）在《木豆叶指纹图谱及其提取物对心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究》文中指出研究背景心肌缺血后有效地再灌注治疗是限制急性心肌缺血性坏死的最有效方法。然而心肌缺血再灌注的最终结果不但取决于缺血持续的时间,也依赖于发生再灌注损伤的程度。再灌注时伴随出现的氧自由基增多、细胞内钙超载、微血管损伤、多型核白细胞积聚以及炎症的激活,可导致心肌缺血再灌注损伤（Myocardial ischemia reperfusion injury, MIRI）,引起细胞损伤的进一步加重；另外,心脏直视手术中,体外循环复灌中引起的心肌缺血性损伤和再灌注损伤是影响术后心脏功能恢复的重要因素,其损伤越来越引起人们的重视,寻求切实有效的方法来治疗缺血再灌注损伤一直是心血管外科领域的研究重点。近年来,中医药对MIRI的保护作用的实验研究得到重视,特别是传统中草药中的提取物,相关研究已经证实了其在MIRI中的有效性和实用性。本研究所选药材木豆叶为豆科木豆属落叶灌木木豆（Cajanus cajan （L.）Millsp）的干燥叶片及嫩枝。木豆叶中主要含有牡荆苷、异牡荆苷、木犀草素等多种黄酮类成分,具有降血压、止痉挛、抗感染、抗菌、辐射保护以及清除自由基的作用。近年来,有关木豆叶提取物的相关报道较多,但是关于木豆叶提取物应用于治疗心血管疾病的药理学研究鲜有报道,开发适合预防或治疗心血管疾病的木豆叶提取物前景广阔。随着对木豆叶及其提取物临床疗效的进一步研究,木豆叶药材的质量控制问题也渐渐受到人们的关注。目前,木豆叶的质量控制多采用牡荆苷、异牡荆苷作为指标,但仅仅依靠单一或几个化学成分并不能全面体现木豆叶的药效,也不能从整体上评价木豆叶的质量,不利于木豆叶的临床应用和国际化。中药指纹图谱质量控制技术能够确保中药、中成药成分的一致性、疗效的安全性及可靠性,能全面反映中药材所含化学成分的种类与数量,从整体上控制药材质量,既符合传统中医药理论,又符合现代化药品质控的技术手段支持。囚此,中药指纹图谱目前已成为公认的反映中药材及中药制剂质量标准的理想方法。然而,目前对于木豆叶提取物尚没有系统的指纹图谱研究。鉴于木豆叶治疗心血管疾病的开发潜力,以及色谱指纹图谱对评价药材质量的有效性,本研究建立了木豆叶水提物的指纹图谱,并根据指纹图谱结果选用海南产木豆叶药材,通过建立大鼠急性心肌缺血再灌注损伤模型,观察对比不同剂量木豆叶水提物对再灌注损伤的影响,并探讨其可能的作用机制。研究目的（1）建立木豆叶提取物HPLC指纹图谱,为木豆叶药材的鉴别与质量控制提供参考；（2）通过在整体动物水平模拟心肌缺血再灌注损伤,观察木豆叶提取物对受损心肌的保护作用,并比较不同剂量的木豆叶提取物对大鼠缺血再灌注心肌的作用是否有差异；（3）通过对各项指标的检测,评估H202对H9c2细胞造成的损伤,确定木豆叶提取物及H202作用的最佳剂量,观察木豆叶提取物预处理对H202诱导的H9c2细胞氧化应激损伤后的保护作用；（4）通过应用PI3K抑制剂,观察木豆叶提取物对H202损伤后H9c2细胞p-Akt、eNOS以及p-eNOS蛋白表达的影响,探讨其可能的信号调控机制。研究方法（1）木豆叶提取物HPLC指纹图谱的建立。采用Diamonsil C18（2） （250 mm×4.6 mm,5μm）,以甲醇-1%冰醋酸为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL-min-1,柱温40℃,检测波长268 nm。（2）木豆叶提取物对雄性SD大鼠急性心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究。采用健康SD雄性大鼠,结扎左冠状动脉前降支30min,再灌注90min建立心肌缺血再灌注损伤模型,记录缺血期间及再灌注期间心功能的变化；通过HE染色观察木豆叶提取物对缺血再灌注损伤心肌细胞形态学的影响；对各组心肌梗死面积进行统计；记录心率失常发生率及持续时间；检测大鼠血清中LDH、SOD、MDA、NO、GSH-PX、CK等生化指标的含量；（3）木豆叶提取物预处理对H202损伤后H9c2细胞保护作用及其作用机制的研究。采用MTT法,以过氧化氢（H202）作为外源性氧化应激刺激,观察木豆叶提取物对受损H9c2细胞活性的影响,以及木豆叶提取物对培养液上清LDH、SOD、MDA及NO含量的影响,并确定H202及木豆叶提取物作用的最佳剂量;采用Western-bloting方法分析木豆叶提取物对加入PI3K抑制剂预处理后的受损H9c2细胞内p-Akt、eNOS以及p-eNOS蛋白量的影响。研究结果采用高效液相色谱仪分析木豆叶水提物,分别建立了云南木豆叶和海南木豆叶水提物的指纹图谱,该方法精密度高、重现性和稳定性良好。对海南及云南两地木豆叶药材分别进行指纹图谱分析,结果显示,两地木豆叶药材共有指纹峰较多,确认其中1个峰的归属为牡荆苷。云南木豆叶水提物指纹图谱和海南木豆叶相比,色谱峰在数的方面基本相仿,即基本成分相似,但色谱峰在“量”的方面即色谱峰面积相差较大。整体动物实验表明,结扎大鼠左冠状动脉前降支所致心肌缺血再灌注损伤,模拟了许多心血管疾病共同的病理生理过程一氧自由基增多,木豆叶提取物可以改善大鼠心功能,减轻再灌注损伤造成的心肌细胞水肿、充血程度,缩小心肌损伤面积,降低血清中LDH、MDA、CK的含量,并提高SOD、NO、GSH-PX的含量。细胞实验表明,木豆叶提取物可以提高细胞存活力,降低细胞上清液中LDH的漏出量,升高SOD活性,降低MDA生成量,升高NO含量,抑制H9c2细胞因H202损伤后导致的细胞凋亡,上调p-Akt及p-eNOS蛋白量的表达。合用PI3K抑制剂LY294002可对抗木豆叶提取物的上述保护作用,结果提示PI3K可能是木豆叶提取物的保护作用通路上的信号靶点。研究结论本课题所建立的木豆叶指纹图谱具有较高的重现性、专属性和可行性,为木豆叶质量控制提供了新的手段,并且为木豆叶药理作用的进一步研究提供了物质基础。木豆叶水提物对结扎大鼠冠状动脉左前降支所致心肌缺血再灌注损伤和H2O2损伤的H9c2细胞均具有保护作用。初步表明木豆叶提取物可通过提高大鼠抗氧化酶活性,增强清除自由基能力,减轻缺血再灌注导致的自由基损伤。其作用机制推测为木豆叶提取物诱导心肌细胞产生适量NO作为触发因子激活其下游的PI3K,产生预适应样保护作用,上调蛋白p-Akt及p-eNOS的表达,从而产生心肌保护作用；上调的eNOS可进一步促进NO生成,延续木豆叶提取物在第二窗中的保护作用。
王华[6]（2009）在《滋肾通络方对局灶性脑缺血大鼠神经细胞保护作用的研究》文中指出目的:探讨滋肾通络方对局灶性脑缺血大鼠神经细胞的保护作用。方法:用线栓法制备大脑中动脉闭塞（MCAO）大鼠模型,随机分为模型组、西药组、中药低剂量组及中药高剂量组各10只,并设假手术组。利用颅脑CT、氨基酸自动分析仪、化学法、放射免疫分析法及电镜等手段,观察滋肾通络方对MCAO大鼠病灶大小、脑组织海马区中枢神经递质（谷氨酸（Glu）、天门冬氨酸（Asp）、甘氨酸（Gly））的含量、血清一氧化氮（NO）和血浆内皮素-1（ET-1）的水平及病理形态学的改变,并用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学方法观察滋肾通络方对代谢性谷氨酸受体1α（mGluR1α）和脑源性神经营养因子（BDNF）蛋白及基因表达的影响。结果:滋肾通络方治疗20天,可明显缩小MCAO大鼠颅脑CT显示的病灶范围大小,改善大鼠神经行为异常,减少海马区脑组织兴奋性氨基酸（Glu及Asp）的含量以及Gly的含量,升高血清NO、降低血浆ET-1水平,升高NO/ET-1的比值,显着减少mGluR1α的蛋白及其mRNA含量,增加BDNF的基因表达,并明显改善神经细胞的病理形态学变化。结论:滋肾通络方可显着减少缺血性脑卒中的神经损伤,这与其下调mGluR1α的表达,促进BDNF的合成,抑制兴奋性氨基酸的神经毒作用,改善血管内皮功能等作用有关。
成小蔓,王永红,周远大,何海霞[7]（2008）在《雌二醇对去势大鼠局灶性脑缺血再灌注后Ang-1mRNA表达的影响》文中研究表明目的:探讨雌二醇对去势大鼠局灶性脑缺血再灌注后Ang-1mRNA表达的影响。方法:利用6月龄健康Wistar’s雌性野生（WT）去势大鼠和雌激素α受体基因敲除（ERKO）去势大鼠的脑缺血再灌注模型（MCAO）进行实验研究。实验分为4组,WT去势大鼠安慰剂组（A组）、苯甲酸雌二醇组（B组）;ERKO去势大鼠安慰剂组（C组）、苯甲酸雌二醇组（D组）。采用放射免疫分析、激光多普勒血流（LDF）仪、CD34血管内皮标记物免疫组化染色和mRNA的定量分析,分别对各组去势大鼠的血浆雌二醇水平、脑血流量的变化、脑缺血再灌注后脑组织血管密度的改变以及Ang-1、Ang-2、Tie-2、VEGF、VEGFR-1、VEGFR-2mRNA的表达进行了检测。结果:经雌二醇处理的WT和ERKO去势大鼠,其血浆雌二醇水平分别为198.13±87.50pg/ml和209.36±92.73pg/ml,高于各自的对照组（p<0.01）。同时,经雌二醇处理的wtmaco去势大鼠,其脑缺血再灌注后脑血流的变化幅度为42.4+13.9%;大脑基底核、顶叶皮层的毛细血管密度分别为38.3+12.5PU和41.9+14.1PU;脑组织中Ang-1mRNA呈6.1+1.8的高表达。这些结果均高于各自的对照组（p<0.01）。而在经雌二醇处理的ERKO大鼠中则未发现这些变化。结论Ang-1是雌激素保护、脑血流恢复、脑毛细血管密度增加等脑缺血再灌注后损伤修复诸多环节中的关键一环,Ang-1是雌二醇介导的神经保护的重要分子。
张青川[8]（2007）在《针药结合对实验性脑缺血大鼠血清NO、TNF-α含量影响的研究》文中研究表明缺血性中风是中老年人的常见病,具有发病率高、死亡率高、致残率高的特点,严重威胁着人类的生命和健康。中医在治疗缺血性中风方面显示出了一定的优势。因此研究缺血性中风的病理生理及各种治疗方法的作用机制,寻求适当、有效、方便的治疗措施,是中医临床及实验研究的主要内容之一。本文包含综述和实验研究两部分,其中综述概括了传统医学对缺血性中风的认识,总结了近年来针、药对脑缺血疾病脑组织、血液中NO含量影响的研究进展及近年来针刺治疗缺血性中风病的情况;实验部分包括:目的:观察局灶性脑缺血模型大鼠缺血后12h,24h,3d不同时间缺血侧脑组织形态学改变,血清中TNF-α、NO含量的变化,以及针药结合对以上各项指标的影响,以进行针药结合综合疗法与单一针刺疗法及针药各时间段的疗效比较,并探讨针药结合对其影响的调节机制,进而为临床治疗缺血性中风提供一种较好的新的治疗途径。方法:SD雄性大鼠150只,体重320±20g,随机分为正常组（15只）、模型组、针刺组、针药结合组（各45只）。采用线栓法闭塞大鼠大脑中动脉造成局灶性脑缺血模型,针刺组和针药结合组在相应的时间针刺百会透曲鬓穴,针药结合组在针刺的同时行脑血康灌胃。应用苏木精-伊红（HE）染色法观察缺血侧脑组织神经元缺血坏死情况,炎症免疫反应改变,炎性细胞粘附、浸润情况;采用硝酸酶还原法测定血清NO的含量;采用双抗体夹心法测定血清TNF-α的含量。结果:（1）局灶性脑缺血早期（12h-3d）缺血皮质出现神经元变性坏死和炎性细胞聚集、粘附及浸润,脑组织坏死范围和程度随着病程进展,炎症反应的继续而扩大加重。针药结合可降低炎性细胞粘附、浸润,减缓炎症免疫反应,减轻神经元坏死程度。（2）在脑缺血12h、24h、3d后血清中NO的含量较正常高（P<0.05）,且呈逐渐增高的趋势。针药结合与针刺均能降低其含量（P<0.05）,并且24h及3d时针药结合疗法优于针刺疗法（P<0.05）。（3）在脑缺血12h、24h、3d后血清中TNF-α含量较正常高（P<0.05）,但在此时间段内12h时含量最高,24h和3d时逐渐降低,针药结合能不同程度的降低血清TNF-α的含量（P<0.05）,并且在三个时间点作用效果优于单一针刺方法（P<0.05）。结论:针药结合能够在一定程度上抑制某些自由基的产生、降低炎性细胞因子的含量,从而抑制细胞毒性物质的释放,抑制了缺血后迟发性神经元损伤的发生,改善了微循环,促进了大脑血供,有利于大鼠脑神经功能的恢复。并且针药结合综合疗法调节作用要优于单一的针刺疗法。总之,针药结合可以调节下丘脑-垂体-肾上腺系统,进一步影响神经-内分泌-免疫调节网络,能够有效的调节各细胞因子的网络平衡关系,从而调整机体紊乱功能状态行脑保护的作用。这可能是针药结合治疗缺血性脑血管疾病的重要机理之一。
尹天雷[9]（2007）在《超微补阳还五汤对局灶性脑缺血模型大鼠神经元保护效应及机制研究》文中指出背景:缺血性脑血管病是临床常见病、多发病,有病死率高、致残率高的特点,脑缺血后神经元损害是其病理机制的核心部分,因而探寻神经元保护剂是缺血性脑血管病的研究热点。补阳还五汤是治疗该类疾病的常用方剂之一,对缺血性脑血管病的治疗具有显着疗效和一定特色。目的:（1）通过对超微补阳还五汤与传统补阳还五汤的有效成分的对比研究,探讨超微复方制剂的特点,为中药新型饮片的研制作出有益的探索。（2）在建立局灶性脑缺血大鼠模型基础上,通过动物实验,探讨超微补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠神经元损伤的保护作用及其机制,为治疗脑梗塞的临床用药提供实验依据。方法:（1）采用一系列试验对超微补阳还五汤与传统汤剂的有效成分进行对比研究。对当归、赤芍、川芎、红花、桃仁的主要有效成分进行薄层鉴别研究,并对主要成分进行含量测定;采用《中国药典》收录的相关方法检测重金属、砷盐含量以明确其安全性;对水溶性浸出物和正丁醇浸出物进行含量测定对比研究。（2）采用栓线法复制MCAO大鼠模型,随机分成六组灌胃给药;在1天、3天、7天、14天四个时点观察各相应指标以探求超微补阳还五汤对脑缺血神经元损伤的保护作用及机制。对大鼠脑缺血损伤的保护作用选用行为学变化及组织形态学变化等指标,从对氧自由基的影响对其进行验证;对作用机制的探求从NGF及其受体（TRKA）的表达和信号转导机制（PI3K/PKB）两个方面进行。具体方法则为检测血浆SOD、MDA的活性变化,用免疫组化法和分子生物学方法观察对脑组织中NGF、TRKA及PI3K、CREB、AKT的表达的影响。结果:（1）TLC测定各组供试样品在色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,且复方超微补阳还五汤浸泡液中主要有效成分斑点较传统汤剂更明显,清晰;对其主要成分的含量测定显示超微补阳还五汤中黄芪甲苷含量与传统汤剂相当;对砷盐、重金属检测未发现其含量超标;对浸出物的测定显示超微补阳还五汤水溶性浸出物为传统汤剂水溶性浸出物的1.22倍,正丁醇浸出物为其传统汤剂的1.26倍,均高于传统汤剂。（2）超微补阳还五汤可降低脑缺血损伤大鼠神经功能评分,并改善脑组织缺血的病理损伤,其作用明显优于模型组及假手术组;超微高剂量组作用优于传统汤剂组。（3）超微补阳还五汤可提高脑缺血后血中SOD活性并降低MDA,其作用明显优于模型组及假手术组;超微高剂量组作用优于传统汤剂组。（4）超微补阳还五汤可上调脑缺血后脑组织NGF及其受体TRKA的表达,并增强PI3K/AKT信号转导的表达,其作用明显优于模型组及假手术组;超微高剂量组与传统汤剂比较其影响有明显增高的优势。结论:（1）补阳还五汤及其超微制剂可以改善局灶性脑缺血大鼠神经功能缺损评分及脑组织病理变化,提高脑缺血后血液SOD活性并降低MDA活性以减弱氧自由基的毒性反应,对脑缺血神经元损伤具有保护作用。（2）超微补阳还五汤保持了传统补阳还五汤中的有效成分,且有效成分的溶出相对传统汤剂更具优势。（3）超微补阳还五汤可提高脑缺血后脑组织神经营养因子PI3K/PKB信号转导途径的表达,提高神经生长因子及其受体表达水平,这可能是超微补阳还五汤对脑缺血神经元损伤的保护作用机制之一。（4）超微补阳还五汤以1/2等效剂量时即可达与传统汤剂相同的作用效果,以等效剂量时其作用效应有明显增加的趋势。综上,本论文采用药物化学、药理学方法以及免疫组化、分子生物学方法,以超微技术对补阳还五汤复方制剂与传统补阳还五汤标准汤剂进行对照研究,论证了超微技术在促进中药复方制剂（补阳还五汤）有效成分溶出上的优势,并从神经营养因子通路（即信号转导机制）角度揭示了超微补阳还五汤的作用机制,具有显着的创新性。
施昱丞[10]（2007）在《针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠星形胶质细胞影响的实验研究》文中研究指明研究目的:近年来脑血管病的发病率呈现较快的上升趋势,该类疾病的致残率和病死率较高。动脉粥样硬化是脑血管病的基本病因之一,而血脂代谢紊乱可致动脉粥样硬化,这在国内外许多研究报道中已证实;血脂异常与脑血管疾病密切相关。高脂血症是引起和加重动脉粥样硬化的病理基础,是导致脑血管疾病的重要危害因素;高脂血症约占整个脑卒中发病率的1/3,因此,降低血脂对减少脑血管疾病的发病率具有重要的意义。在临床上脑血管病患者大多有高脂血症,而高脂血症患者在脑卒中后,会因原本的血脂代谢紊乱,更加重脑缺血后损伤,比单纯性脑缺血损伤更严重;有效地调节血脂水平就可预防脑血管疾病的发生。因此寻找适当有效的早期干预防治措施是针灸临床与实验研究的重要课题之一。研究方法:（1）首先以高脂饲料喂养大鼠造成高脂血症大鼠后,采用氯化铁（FeCl3）化学诱导大脑中动脉血栓闭塞模型法,将高脂血症大鼠造成高血脂合并脑缺血模型,将动物随机分为八组,电针术前干预及脑缺血后全程治疗;（2）应用生化法观察高血脂大鼠脑缺血后血脂四项变化及针刺的影响;（3）应用神经行为学指标观察治疗前后神经症状的改善情况;应用形态学方法观察缺血侧及海马区大脑病理改变状况及针刺的作用;（4）采用免疫组化方法观察针刺前后大鼠缺血侧及海马区星形胶质细胞表达GFAP、HSP70、S-100β、vimentin等的变化;（5）通过双抗夹心ABC-ELISA法,测定脑匀浆中神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的含量。结果:1.经典高脂配方饲料喂养所致的高血脂模型较为理想,然后采用氯化铁（FeCl3）化学诱导大脑中动脉血栓闭塞模型法,将高脂血症大鼠造成高血脂合并脑缺血模型。以大鼠血脂四项的变化,可以作为大鼠高血脂模型检测的方法之一。2.大鼠在造成脑缺血损伤后,1-2h的神经行为症状均有阳性反应,各脑缺血模型组神经行为症状评分显着高于正常对照组和高血脂模型组,脑缺血模型各组行为症状评分总体高于各针刺组,针刺各组有减少评分趋势。提示针刺可以降低大鼠神经行为症状评分,改善神经功能缺损体征。3.针刺可以通过降低总胆固醇、低密度脂蛋白,升高高密度脂蛋白的含量,有效地调节血脂水平。4.在单纯高血脂大鼠海马区、缺血区,与正常对照组比较,高血脂模型组的GFAP、HSP70、S-100β及vimentin等的阳性细胞个数、面密度、光密度减少,经针刺治疗7d后,与高血脂模型组比较,高血脂治疗组的GFAP、HSP70、S-100β及vimentin等的阳性细胞个数、面密度、光密度增加。而在脑缺血损伤发生后,在大鼠海马区、缺血区GFAP、HSP70、S-100β及vimentin等的阳性细胞个数、面密度、光密度显着增加;经针刺治疗7d后,与脑缺血模型组比较,脑缺血治疗组的GFAP、HSP70、S-100β及vimentin等的阳性细胞个数、面密度、光密度增加。在高脂血症大鼠造成高血脂合并脑缺血模型后,与脑缺血模型组比较,高血脂合并脑缺血模型组在大鼠海马区、缺血区GFAP、HSP70、S-100β及vimentin等的阳性细胞个数、面密度、光密度降低。而与高血脂合并脑缺血模型组比较,高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组、Ⅱ组GFAP、HSP70、S-100β及vimentin等的阳性细胞个数、面密度、光密度升高均有极显着差异, p<0.01;与高血脂合并脑缺血治疗Ⅱ组比较,高血脂合并脑缺血Ⅰ组GFAP、HSP70、S-100β及vimentin等的各项升高均有极显着差异,p<0.01;5.NGF、BDNF及bFGF的含量:脑缺血治疗组>脑缺血模型组>正常对照组;正常对照组>高血脂治疗组>高血脂模型组。与正常对照组比较,高血脂模型组及高血脂合并脑缺血模型组的NGF、BDNF及bFGF含量均极显着低于正常对照组（P<0.01）;与高血脂合并脑缺血模型组比较,高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组及高血脂合并脑缺血治疗Ⅱ组的NGF及bFGF含量均极显着高于高血脂合并脑缺血模型组（P<0.01） ;高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组的BDNF含量极显着高于高血脂合并脑缺血模型组（P<0.01）,高血脂合并脑缺血治疗Ⅱ组的BDNF含量高于高血脂合并脑缺血模型组,但二者无差异（P>0.05）;高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组及高血脂合并脑缺血治疗Ⅱ组的NGF及BDNF含量均极显着高于高血脂合并脑缺血模型组（P<0.01） ;高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组的bFGF含量高于高血脂合并脑缺血治疗Ⅱ组。结论:1.本实验首先选用经典高脂饲料喂养大鼠6周造成高血脂模型后,接着再用FeCl3化学诱导大脑中动脉血栓闭塞模型法造成局灶性脑缺血,最终二种模型结合造成高血脂合并脑缺血模型。高血脂合并脑缺血模型建立成功,将可为往后的针刺对高血脂合并脑缺血大鼠星形胶质细胞影响的各种实验研究及探究高血脂合并脑缺血的发病机理提供正确的动物模型。2.脑缺血损伤过程中,高脂血症可加重脑缺血损伤程度;3.针刺可以通过降低总胆固醇、低密度脂蛋白,升高高密度脂蛋白的含量,有效地调节血脂水平。4.持续电针治疗可使星形胶质细胞表达GFAP、HSP70、S-100β、vimentin及大脑中神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的含量,在相当长时间内保持较高水平,有利于受损神经元的修复;电针介入治疗时间点有其重要性,电针早期介入治疗可能是治疗高血脂合并脑缺血疾病的良策,而电针持续增高星形胶质细胞表达GFAP、HSP70、S-100β、vimentin及持续增高大脑中神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的含量,可能是电针抗高血脂合并脑缺血损伤的重要机制之一。
二、雌二醇对去势沙鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织中NO和NOS的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、雌二醇对去势沙鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织中NO和NOS的影响（论文提纲范文）
（1）GPER1介导的雌激素非基因组效应发挥全脑缺血神经元保护作用的在体实验研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 第一部分 脑缺血再灌注损伤发病机制 |
| 第二部分 雌性激素和雌性激素的神经保护作用 |
| 第一部分 去势SD大鼠血清E2浓度变化和GPER1在正常去势SD大鼠海马区神经元的表达研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 四脑血管阻断全脑缺血模型的建立 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第三部分G1对大鼠全脑缺血缺氧后海马的形态学及行为学保护的研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第四部分GPER1激活对全脑缺血大鼠海马神经元损伤的保护机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（2）葛根有效成分结构修饰体—染料木素磺酸钠对脑缺血的保护及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 1 祖国医学对脑血管病的认识及现代研究进展 |
| 1.1 病因、病机、病位 |
| 1.2 辨证分型 |
| 1.3 中风的中医治疗 |
| 2 现代医学对缺血性脑病的研究进展 |
| 2.1 能量代谢障碍 |
| 2.2 氧化应激 |
| 2.3 NO的作用 |
| 2.4 兴奋性毒性损伤 |
| 2.5 钙超载 |
| 2.6 炎症反应 |
| 2.7 细胞凋亡 |
| 3 葛根及其有效成分的研究现状 |
| 第二部分 实验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 主要试剂及试剂配制 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 1.4 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 GSS对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用 |
| 2.2 GSS对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护机制 |
| 3 讨论 |
| 3.1 GSS对脑缺血再灌注损伤的保护作用 |
| 3.2 抗氧化应激机制 |
| 3.3 调节能量代谢机制 |
| 3.4 抗兴奋性毒性损伤机制 |
| 3.5 抗炎症反应机制 |
| 3.6 抗凋亡机制 |
| 3.7 DREAM在GSS脑保护效应中的作用 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献： |
| 攻读博士学位期间主要研究成果及发表论文 |
（3）丹参、川芎有效部位配伍及参芎注射液对脑缺血再灌注损伤的保护作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 文献研究 丹参、川芎配伍抗脑缺血研究概况 |
| 1. 丹参研究 |
| 1.1 丹参总酚酸 |
| 1.2 丹参总酮 |
| 2 川芎研究 |
| 2.1 川芎生物碱 |
| 2.2 川芎有机酸 |
| 3 参芎注射液研究 |
| 参考文献 |
| 第二部分 丹参和川芎主要有效部位配伍药效学研究 |
| 一、材料与方法 |
| (一) 实验材料 |
| 1. 实验动物 |
| 2. 试剂和药品 |
| 3. 主要器材 |
| (二) 实验方法 |
| 1. 丹参和川芎主要有效部位的组合 |
| 2. 脑缺血-再灌注(MCAO)模型的建立 |
| 3. 分组与给药 |
| 4. 局灶性脑缺血再灌注大鼠神经功能、海马区基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA表达及脑组织中SOD和MDA检测 |
| 5. 不同时间点大鼠血浆中SOD活力和MDA含量的测定 |
| 6. 统计学分析 |
| 二、结果 |
| (一) 丹参、川芎主要有效部位组合对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经功能、脑部SOD和MDA含量、以及MMP-9 mRNA表达的影响 |
| 1. 对大鼠神经功能的影响 |
| 2. 对大鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的影响 |
| 3. 对脑部SOD活力和MDA含量的影响 |
| (二) 丹参、川芎主要有效部位组合对不同时间点大鼠血浆中SOD活力和MDA含量的影响 |
| 1. 不同时间点SOD活力的变化 |
| 2. 不同时间点MDA含量的变化 |
| 三、分析与讨论 |
| (一) 基质金属蛋白酶-9(MMP-9)与脑缺血 |
| (二) 线栓法(大脑中动脉栓塞,MCAO)大鼠局灶性脑缺血模型的制作 |
| 1. 制作原理 |
| 2. 动物的选择 |
| 3. 麻醉剂的选择 |
| 4. 尼龙线的选择及放置 |
| 5. 模型制备成功的判断 |
| 四、小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 参芎注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用 |
| 一、材料与方法 |
| (一) 实验材料 |
| 1. 实验动物 |
| 2. 试剂和药品 |
| 3. 主要器材 |
| (二) 实验方法 |
| 1. 脑缺血-再灌注(MCAO)模型的建立 |
| 2. 神经行为学评价 |
| 3. 动物分组与给药 |
| 4. 缺血脑片的制备 |
| 5. 脑梗死体积的测算 |
| 6. 脑匀浆SOD、NOS、LDH活性,NO、MDA含量测定 |
| 7. Elisa检测TNF-α |
| 8. Elisa检测IL-1β |
| 9. RT-PCR测定脑组织中IL-1β、TNF-αmRNA |
| 10. 统计学分析 |
| 二、实验结果 |
| (一) 参芎注射液对脑缺血再灌注大鼠神经功能缺损症状的影响 |
| (二) 参芎注射液对脑缺血再灌注大鼠脑梗死的影响 |
| (三) 参芎注射液对脑缺血再灌注大鼠SOD、LDH和MDA的影响 |
| (四) 参芎注射液对脑缺血再灌注大鼠NOS和NO的影响 |
| (五) 参芎注射液对脑缺血再灌注大鼠脑组织中IL-1β、TNF-α的影响 |
| 1. Elisa法检测脑组织中IL-1β、TNF-α的表达 |
| 2. Elisa法检测脑组织中IL-1β、TNF-α mRNA的表达 |
| 三、分析与讨论 |
| (一) 脑缺血与自由基损伤 |
| (二) 脑缺血与炎症损伤 |
| 四、小结 |
| 参考文献 |
| 结沦 |
| 致谢 |
| 文献综述 脑缺血损伤机制研究 |
| 1. Ca~(2+)超载与脑缺血 |
| 2. 自由基与脑缺血 |
| 3. 氨基酸与脑缺血 |
| 4. 血脑屏障与脑缺血 |
| 5. 细胞凋亡与脑缺血 |
| 6. 炎症损伤与脑缺血 |
| 参考文献 |
（4）低剂量Genistein诱导eNOS/Nrf2-ARE通路对缺血后神经元氧化应激损伤和空间学习记忆缺陷的保护作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 低剂量 Genistein 上调 eNOS-HSP90 信号模块，减轻缺血后海马 CA1 区神经元损伤并改善大鼠空间学习记忆缺陷 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 Genistein 通过 eNOS 活性上调 Keap1/Nrf2-ARE 信号，减轻海马 CA1 区神经元缺血后的氧化应激损伤 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 Genistein 对缺血后海马 CA3 区 Nrf2 信号的影响及其对 CA1 区神经元形态的调控 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 Nrf2-ARE 信号通路及植物雌激素 Genistein 抗神经元降解作用的分子机制 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）木豆叶指纹图谱及其提取物对心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 木豆叶研究进展 |
| 第二章 心肌缺血再灌注损伤病理生理改变及其发生机制 |
| 第三章 药物预适应与心肌缺血再灌注损伤的药物治疗 |
| 第四章 药物预适应信号转导通路研究 |
| 第二篇 实验研究 |
| 第一章 木豆叶HPLC指纹图谱研究 |
| 第一节 材料与方法 |
| 第二节 实验结果 |
| 第三节 分析与讨论 |
| 第四节 小结 |
| 参考文献 |
| 第二章 木豆叶水提物对心肌缺血再灌注损伤的保护作用 |
| 第一节 材料与方法 |
| 第二节 实验结果 |
| 第三节 分析与讨论 |
| 第四节 小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 木豆叶水提物对H_2O_2损伤H9c2细胞的保护作用及其机制研究 |
| 第一节 木豆叶水提物对H_2O_2损伤H9c2细胞的保护作用 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 第二节 木豆叶水提物对H_2O_2损伤H9c2细胞保护作用信号转导通路的研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 第三节 分析与讨论 |
| 第四节 小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 创新性自我评价 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文及参加的课题研究 |
| 致谢 |
（6）滋肾通络方对局灶性脑缺血大鼠神经细胞保护作用的研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 一、现代医学关于脑缺血发生的神经生化基础及治疗现状 |
| （一） 脑缺血神经元损伤的病理机制 |
| （二） 脑缺血后其它氨基酸递质的变化 |
| （三） 现代医学对神经保护的治疗现状 |
| 二、祖国医学关于脑缺血后神经保护的研究现状 |
| 三、滋肾通络方对脑缺血后神经保护作用的理、法、方、药探析 |
| （一） 理——肾阴不足，络脉瘀阻是脑缺血的病因病机 |
| （二） 法——滋肾通络法是脑缺血的基本治法 |
| （三） 方——滋肾通络方对脑缺血神经细胞保护的可行性 |
| （四） 药——滋肾通络方体现滋补肾阴，活血通络治法 |
| 第二部分 实验研究 |
| 一、实验基本情况 |
| （一） 实验动物 |
| （二） 动物分组 |
| （三） 实验药物及制备 |
| （四） 用药方法 |
| （五） 统计学方法 |
| （六） 讨论 |
| 二、局灶性脑缺血大鼠模型的制备 |
| （一） 实验材料 |
| （二） 模型的制备及评价方法 |
| （三） 讨论 |
| 三、滋肾通络方对局灶性脑缺血大鼠神经行为评分的影响 |
| （一） 实验器材 |
| （二） 实验方法 |
| （三） 实验结果 |
| （四） 讨论 |
| 四、滋肾通络方对局灶性脑缺血大鼠颅脑CT 的影响 |
| （一） 实验器材 |
| （二） 实验方法 |
| （三） 实验结果 |
| （四） 讨论 |
| 五、滋肾通络方对局灶性脑缺血大鼠脑组织病理形态学改变的影响 |
| （一） 实验材料 |
| （二） 实验方法 |
| （三） 实验结果 |
| （四） 讨论 |
| 六、滋肾通络方对局灶性脑缺血大鼠脑组织氨基酸递质含量的影响 |
| （一） 实验材料 |
| （二） 实验方法 |
| （三） 实验结果 |
| （四） 讨论 |
| 七、滋肾通络方对局灶性脑缺血大鼠脑组织mGluR1α基因表达的影响 |
| （一） 实验材料 |
| （二） 实验方法 |
| （三） 实验结果 |
| （四） 讨论 |
| 八、滋肾通络方对局灶性脑缺血大鼠脑组织BDNF 蛋白含量的影响 |
| （一） 实验材料 |
| （二） 实验方法 |
| （三） 实验结果 |
| （四） 讨论 |
| 九、滋肾通络方对局灶性脑缺血大鼠血清（血浆）NO/ET-1 含量的影响 |
| （一） 实验器材 |
| （二） 实验方法 |
| （三） 实验结果 |
| （四） 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 附录 |
| 在读期间发表论文、着作、科研情况 |
| 致谢 |
| 查新报告 |
| 科研成果 |
| 科学技术成果鉴定证书 |
| 详细摘要 |
（8）针药结合对实验性脑缺血大鼠血清NO、TNF-α含量影响的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 传统医学对缺血性中风的认识 |
| 1 古代医家对缺血性中风的认识 |
| 2 近代医家对缺血性中风的认识 |
| 参考文献 |
| 综述二 药物及针刺对脑缺血疾病脑组织、血液中NO含量影响的研究进展 |
| 1 西药的相关性研究 |
| 2 中药的相关性研究 |
| 3 针刺的相关性研究 |
| 4 结语 |
| 参考文献 |
| 综述三 近年来针刺治疗缺血性中风病的概况 |
| 1 体针疗法 |
| 2 头针疗法 |
| 3 腹针疗法 |
| 4 眼针疗法 |
| 5 火针疗法 |
| 6 围针疗法 |
| 7 其他针法疗法 |
| 8 结语 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 分析讨论 |
| 1 立题依据 |
| 2 针药结合对实验性脑缺血大鼠血清NO含量的影响及其机制 |
| 3 针药结合对实验性脑缺血大鼠血清TNF-α含量的影响及其机制 |
| 4 针药结合对实验性脑缺血大鼠缺血脑组织的影响及其机制 |
| 5 实验性脑缺血血清NO与TNF-α的关系 |
| 6 本实验的不足及改进 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附病理图片 |
（9）超微补阳还五汤对局灶性脑缺血模型大鼠神经元保护效应及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 理论探讨 |
| 1.现代医学对脑缺血性疾病的认识及治疗现状 |
| 2.脑缺血神经元损伤与内源性保护机制 |
| 2.1 脑缺血神经元损伤病理生理机制与保护对策 |
| 2.2 脑缺血神经元损伤的内源性保护机制 |
| 3.神经营养因子对缺血性神经元损伤的保护及信号转导 |
| 3.1 神经营养因子及受体 |
| 3.2 神经营养因子对脑缺血的神经保护机制 |
| 3.3 神经营养因子表达机制与信号转导途径 |
| 4.中医对脑缺血神经元损伤认识及补阳还五汤保护作用初探 |
| 4.1 中医学对脑缺血神经元损伤的认识 |
| 4.2 补阳还五汤治疗缺血性脑血管疾病的研究进展 |
| 5.中药超微技术研究概要及展望 |
| 第二章 实验研究 |
| 1.超微补阳还五汤与其传统汤剂的有效成分对比研究 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 试剂与仪器 |
| 1.3 方法与结果 |
| 2.超微补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠神经元的保护及从NGF与其受体表达、信号转导方面对其机制的研究 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 结果 |
| 第三章 讨论 |
| 1.超微补阳还五汤与传统汤剂有效成分的对比研究结果探讨 |
| 2.对脑缺血动物模型的选择及实验效果的探讨 |
| 3.对脑缺血损伤神经元损伤的保护效应的探讨 |
| 4.对脑缺血损伤氧自基的影响的探讨 |
| 5.对NGF及其受体表达、信号转导途径影响的探讨 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 发表论文情况 |
| 致谢 |
（10）针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠星形胶质细胞影响的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 针灸治疗高脂血症的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 针刺对实验性脑缺血损伤作用机理研究 |
| 参考文献 |
| 综述三 星形胶质细胞在脑缺血损伤后作用机理的研究 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 高血脂合并脑缺血大鼠模型的建立 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 实验二 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠治疗前后血脂含量变化的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 实验三 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠神经行为症状及病理改变的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 实验四 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠星形胶质细胞表达GFAP 的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 实验五 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠星形胶质细胞表达HSP70 的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 实验六 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠星形胶质细胞表达S-100β的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 实验七 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠星形胶质细胞表达vimentin 的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 实验八 针刺干预后高血脂合并脑缺血大鼠NGF、BDNF、bFGF 含量的变化.. |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综合讨论 |
| 1. 高血脂合并脑缺血大鼠模型的建立 |
| 2. 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠治疗前后血脂的影响及机理研究 |
| 3. 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠神经行为症状及病理改变的影响 |
| 4. 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠海马、缺血区星形胶质细胞表达 GFAP、HSP70、S-100β 及 vimentin 等的影响研究 |
| 5. 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠 NGF、BDNF 及 bFGF 等表达的影响研究 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附图 |
四、雌二醇对去势沙鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织中NO和NOS的影响（论文参考文献）
- [1]GPER1介导的雌激素非基因组效应发挥全脑缺血神经元保护作用的在体实验研究[D]. 高波. 第四军医大学, 2015(03)
- [2]葛根有效成分结构修饰体—染料木素磺酸钠对脑缺血的保护及机制研究[D]. 黄志华. 湖南中医药大学, 2014(09)
- [3]丹参、川芎有效部位配伍及参芎注射液对脑缺血再灌注损伤的保护作用研究[D]. 汪兴宇. 浙江中医药大学, 2014(05)
- [4]低剂量Genistein诱导eNOS/Nrf2-ARE通路对缺血后神经元氧化应激损伤和空间学习记忆缺陷的保护作用[D]. 王瑞敏. 河北医科大学, 2013(10)
- [5]木豆叶指纹图谱及其提取物对心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究[D]. 孙琳. 广州中医药大学, 2011(05)
- [6]滋肾通络方对局灶性脑缺血大鼠神经细胞保护作用的研究[D]. 王华. 山东中医药大学, 2009(07)
- [7]雌二醇对去势大鼠局灶性脑缺血再灌注后Ang-1mRNA表达的影响[J]. 成小蔓,王永红,周远大,何海霞. 中国生物工程杂志, 2008(S1)
- [8]针药结合对实验性脑缺血大鼠血清NO、TNF-α含量影响的研究[D]. 张青川. 北京中医药大学, 2007(02)
- [9]超微补阳还五汤对局灶性脑缺血模型大鼠神经元保护效应及机制研究[D]. 尹天雷. 湖南中医药大学, 2007(02)
- [10]针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠星形胶质细胞影响的实验研究[D]. 施昱丞. 北京中医药大学, 2007(02)