一、培养角膜缘干细胞羊膜移植治疗碱烧伤动物的实验研究（论文文献综述）
吴艳菊[1]（2021）在《含LSCs的原代角膜缘上皮细胞片自体移植对犬大面积角膜损伤的疗效研究》文中研究指明角膜缘干细胞缺乏症（Limbal stem cell deficiency,LSCD）是由于角膜缘干细胞（Limbal stem cells,LSCs）功能障碍或数量不足引起的一种病理现象,角膜上皮被结膜上皮细胞所取代,表现为角膜混浊且出现大量新生血管,视力下降甚至失明。药物治疗或常规手术治疗效果不理想。有研究报道采用含LSCs的角膜缘上皮细胞片自体移植（Autologous cultivated limbal epithelial transplantation,auto-CLET）技术可重建角膜上皮层,恢复角膜缘屏障功能,但在宠物犬的相关试验研究尚未见报道。本试验以无上皮层羊膜为载体,体外构建含LSCs的原代角膜上皮细胞植片,并对LSCD疾病模型犬进行auto-CLET手术治疗,以常规的羊膜移植术和结膜瓣遮盖术为对照组,术后进行眼表临床检查、角膜病理组织学和免疫组化染色观察,以评估其对LSCD疾病模型犬的治疗效果。1.含LSCs犬原代角膜缘上皮细胞植片的构建与鉴定本试验手术采集剖腹产犬胎儿羊膜,采用Dispase Ⅱ酶消化法制作无上皮层羊膜。手术采集3 mm2健康犬角膜缘组织,采用组织块培养法和Dispase Ⅱ酶消化法以无上层羊膜为载体体外培养犬原代角膜缘上皮细胞。根据细胞形态特征、超微结构特点、病理组织学和细胞标志物CK12、ABCG2和p63等进行角膜缘上皮细胞以及LSCs的鉴定。结果显示:Dispase Ⅱ酶消化后的羊膜表面无羊膜上皮细胞残留,暴露的基底膜由大量纵横交错的胶原纤维丝组成,胶原纤维丝完整,无受损或断裂。培养的原代角膜缘上皮细胞为多边形,扫描电镜可见细胞表面有大量微绒毛和微皱,细胞之间以及细胞与羊膜间连接紧密。犬原代角膜缘上皮细胞可在羊膜表面生长为2～3层,并表达角膜上皮细胞标志物CK12以及LSCs标志物ABCG2和p63,表明制作的原代角膜缘上皮细胞移植片含有LSCs,可用于后续的auto-CLET手术。2.含LSCs犬原代角膜缘上皮细胞片自体移植对LSCD疾病模型犬疗效的临床观察本试验选取15只健康比格犬,采用板层切除术建立LSCD疾病模型犬,造模后每7d对实验犬的术眼进行裂隙灯检查和印记细胞学检查,直至实验犬的术眼表面完全被纤维血管膜覆盖,印记细胞学检查角膜表面出现杯状细胞,确定弥漫性LSCD疾病模型犬造模成功。将LSCD疾病模型犬分为三组,分别实施auto-CLET手术、羊膜移植手术和结膜瓣遮盖手术。术后使用裂隙灯观察,对角膜的混浊度、新生血管和荧光素钠染色情况参照相关标准进行评分,并进行基础泪液分泌实验（Schirmer I test,SIT）、泪膜破裂时间（Tear film breakup Time,BUT）和印记细胞学检查（Impression Ctology,IC）评估术后是否存在干眼并发症。结果显示:造模术后35 d时,实验犬角膜表面完全被灰白色纤维血管膜覆盖,角膜混浊不透明,荧光素钠染色大面积着色,IC检查结果显示角膜表面出现杯状细胞,表明角膜上皮被结膜上皮取代,LSCD疾病模型犬造模成功。术后4个月时,auto-CLET组角膜透明度与正常角膜无差异,角膜缘界线清晰,无新生血管入侵,角膜表面荧光素钠点状着色。羊膜移植组和结膜瓣遮盖组角膜表面均存在大量新生血管,角膜混浊,荧光素钠着色。羊膜移植组和结膜瓣遮盖组角膜混浊度和新生血管评分均极显着高于auto-CLET组（p<0.01）,羊膜移植组角膜荧光素钠着色评分显着高于auto-CLET组和结膜瓣遮盖组（p<0.05）。根据治疗效果评估标准,auto-CLET组治疗成功率为77.78%,羊膜移植组和结膜瓣遮盖组均为0。三组术后BUT、SIT和IC结果均低于正常水平,且角膜表面荧光素钠着色,表明三组犬术后均存在干眼症。但auto-CLET组BUT与羊膜移植组和结膜瓣遮盖组相比极显着增加（p<0.01）,auto-CLET组IC等级极显着低于羊膜移植组和结膜瓣遮盖组（p<0.01）,表明auto-CLET组与羊膜移植组和结膜瓣遮盖组相比干眼症较轻。3.含LSCs犬原代角膜缘上皮细胞片自体移植后角膜组织学和免疫组化染色观察将LSCD疾病模型犬分为3组,分别于术前、术后第1、2和4个月采集术眼角膜样品。对采集的眼角膜进行病理组织学和免疫组化染色观察。结果显示:LSCD疾病模型犬角膜表面被结膜上皮覆盖,与基质层连接疏松,有大量新生血管和炎性细胞浸润,PAS染色可见杯状细胞。术后4个月时,auto-CLET组角膜上皮层由5～6层细胞组成,角膜各组成结构与正常角膜相似,角膜缘上皮基底细胞阳性表达p63和ABCG2。羊膜移植组和结膜瓣遮盖组角膜上皮层细胞排列杂乱,与基质层连接疏松,均有大量新生血管和炎性细胞浸润,角膜缘上皮基底细胞均不表达p63和ABCG2。上述试验结果表明,含LSCs的犬原代角膜缘上皮细胞移植片自体移植后成功在角膜表面成活,重建LSCD疾病模型犬角膜上皮层并恢复角膜缘屏障功能,术后角膜透明,无新生血管,成功率高达77.78%。
张凡[2]（2021）在《甘草酸二钾纳米胶束调控HMGB1信号通路治疗角膜化学伤及其机制研究》文中认为目的以碱烧伤为代表的角膜化学伤是一类临床常见的眼科急症,可造成角膜穿孔和并发性白内障等一系列眼部并发症,而临床尚缺乏有效干预措施。因此,研究治疗角膜化学伤新的治疗靶标和有效防治措施具有重要的临床意义。本研究将以小鼠角膜碱性烧伤为模型,探究甘草酸二钾纳米胶束滴眼液对小鼠角膜上皮愈合和角膜新生血管的作用,以及对高迁移率族蛋白B1（High Mobility Group B1,HMGB1）及相关信号通路因子如晚期糖基化终产物受体（Receptor of Advanced Glycation Endproducts,RAGE）和Toll样受体（Toll-like receptors,TLR）表达的影响。方法1.构建甘草酸二钾-瑞巴派特纳米胶束滴眼液,并优化处方,测定其包封率与粒径,评价其储存稳定性;采用兔眼刺激性实验和鸡胚尿囊膜实验考察甘草酸二钾纳米胶束滴眼液的安全性,使用香豆素六为模型药物考察在体吸收特性。2.使用MTT法评价甘草酸二钾纳米胶束对细胞活力的影响,细胞划痕法评价纳米胶束对细胞的促增殖能力。过氧化氢刺激人角膜上皮细胞构建氧化应激模型,检测ROS、SOD和MDA等与氧化应激相关的指标,评价草酸二钾纳米胶束滴眼液对人角膜上皮细胞的保护作用。3.构建小鼠角膜碱烧伤模型,按制定的实验方案对各组小鼠进行治疗。于给药开始后的1、3、5、7、14天利用裂隙灯观察各治疗组小鼠角膜荧光素钠与虎红着色情况,检测各组小鼠角膜上皮修复速度;观察角膜新生血管生长情况,采用FITC-葡聚糖灌注血管,角膜铺片后观察不同组的角膜新生血管密度;角膜敏感度仪测量角膜敏感度;石蜡切片H&E染色观察小鼠角膜结构的病理变化;TUNEL法评价小鼠角膜上皮细胞凋亡情况;ELISA检测小鼠角膜中VEGF、IL-6、IL-1β等炎症因子的含量;利用Western Blot检测HMGB1、RAGE和TLR4蛋白的表达情况。结果1.薄膜水化法制备的甘草酸二钾-瑞巴派特纳米胶束滴眼液的平均粒径为16.56±0.91 nm,多分散性指数为0.377±0.12,Zeta电位为-（7.27±0.591）mV。甘草酸二钾-瑞巴派特纳米胶束滴眼液的包封率为99.97±0.86%。滴眼液无眼表刺激性,接触鸡胚尿囊膜后也无出血、溶血和凝血情况。另外,甘草酸二钾也可以促进模型药物香豆素六的眼表吸收。2.在一定浓度范围内（小于500μg/mL）,甘草酸二钾和胶束具有良好的细胞耐受性,可以促进细胞迁移。甘草酸二钾-瑞巴派特纳米胶束可以有效降低氧化应激水平,调控细胞SOD和MDA的含量（与模型组相比,P<0.05）。3.碱烧伤后的小鼠角膜上皮损坏,愈合缓慢,上皮细胞凋亡增加,角膜敏感度降低。经过甘草酸二钾纳米胶束滴眼液治疗14天,角膜上皮愈合速度显着加快（与PBS组相比,P<0.05）,角膜敏感度提高,且可以显着抑制新生血管的生成,角膜中的炎症因子水平下降。此外,HMGB1/RAGE/TLR4三种蛋白的表达均有不同程度的降低（与PBS相比,P<0.05）。但是,0.1%的透明质酸钠作为阳性对照组,其效果不如胶束组理想。结论甘草酸二钾作为HMGB1的特异性抑制剂,其构建的瑞巴派特纳米胶束可以通过调控HMGB1信号通路治疗角膜碱烧伤,有效抑制角膜新生血管的生成。
陈祖凤[3]（2020）在《维生素C对小鼠角膜碱烧伤修复作用的实验研究》文中研究说明目的:角膜碱烧伤损坏角膜组织结构,破坏角膜微环境,导致角膜缘干细胞功能障碍,延迟角膜损伤修复进程。本文旨在研究维生素C对小鼠角膜碱烧伤修复的促进作用,为临床治疗提供实验依据。方法:45只BALB/c小鼠,随机选择5只作为健康对照组,40只随机平均分为2组,制作右眼角膜碱烧伤模型,每组20只（20眼）:一组为实验组,碱烧伤1天后每日给予维生素C滴眼液（浓度为10%,每小时1次）联合腹腔内注射（50mg/kg,每日1次）处理,持续7天;另一组为对照组,给予无菌生理盐水（0.9%氯化钠溶液,每小时1次）局部滴眼,持续7天。于碱烧伤后第1、4、7、10天通过裂隙灯显微镜观察角膜上皮缺损程度、角膜混浊度及角膜新生血管情况,通过HE染色观察角膜病理组织学改变,免疫组织化学染色检测髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）、角膜缘干细胞标志物p63和PCNA（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、角膜上皮细胞标志物CK3（cytokeratin3,CK3）、肌成纤维细胞标志物α-SMA（α-smooth muscle actin,α-SMA）、角膜新生血管标志物CD31（platelet endothelial adhesion molecule,PECAM-1,CD31）的表达情况。结果:⒈碱烧伤后第1天小鼠角膜上皮损伤脱落,角膜荧光素染色阳性。碱烧伤后第10天,实验组小鼠角膜上皮完整,角膜上皮缺损评分明显低于对照组（0.80±0.20 vs 1.90±0.33,P=0.022）;同时,实验组角膜混浊程度明显改善,角膜混浊评分低于对照组（1.40±0.40 vs 3.00±0.44,P=0.029）。碱烧伤后对照组角膜周边新生血管形成,并逐渐向角膜中央长入,而实验组未见明显角膜新生血管形成,在第7天、第10天角膜新生血管评分低于对照组（第7天:1.00±0.32 vs 2.20±0.20,P=0.013;第10天:0.60±0.25 vs 1.80±0.20,P=0.005）。⒉角膜组织HE染色可见碱烧伤第1天中央角膜上皮缺损,第10天实验组角膜上皮完全修复;对照组角膜上皮仍有少许缺损。免疫组织化学染色显示,碱烧伤后第4、7和10天实验组每视野下（×400倍）p63阳性细胞数分别为（均数±标准差）:16.33±0.88、19.67±1.45、28.67±1.86,对照组分别为:10.33±0.88、13.00±1.16、14±1.16,实验组p63阳性细胞数明显高于对照组（第4天P=0.010、第7天P=0.023、第10天P=0.003）。碱烧伤后第4、7和10天实验组每视野下（×400倍）PCNA阳性细胞数分别为（均数±标准差）:17.33±1.20、21.33±1.20、33.33±2.60,对照组为:9.00±1.16、14.33±1.45、19.00±1.53,实验组PCNA阳性细胞数明显高于对照组（第4天P=0.008、第7天P=0.021、第10天P=0.009）。碱烧伤后第10天,实验组免疫组织化学染色CK3的平均光密度值为0.1001±0.0075;对照组为0.0512±0.0070,实验组明显高于对照组（P=0.009）。⒊碱烧伤后第4天、7天和10天,实验组角膜碱烧伤区域炎性细胞的浸润较少,中央角膜MPO的平均光密度值均显着低于对照组(第4天:1.40×10-4±6.32×10-5 vs 4.90×10-4±8.14×10-5,P=0.027;第7天:4.09×10-5±1.97×10-5 vs2.33×10-4±4.57×10-5,P=0.018;第10天:6.20×10-6±3.64×10-6 vs 5.69×10-5±9.79×10-6,P=0.008)。⒋碱烧伤后第7、10天实验组角膜CD31阳性新生血管数量少于对照组（第7天:4.67±0.89 vs 12.33±0.89,P=0.004;第10天:6.33±1.45 vs 16.33±0.88,P=0.004）,且在第10天,实验组α-SMA的平均光密度值显着低于对照组(1.55×10-4±3.47×10-5 vs 3.76×10-4±4.54×10-5,P=0.018)。结论:维生素C可促进碱烧伤后角膜上皮修复,减少角膜新生血管的形成,减轻角膜混浊程度,抑制碱烧伤后角膜的炎症反应,为维生素C在角膜碱烧伤的治疗中提供实验依据。
李楠钰[4]（2020）在《羊膜-纤维蛋白胶泥的制备及其治疗兔重度眼表碱烧伤的实验研究》文中研究说明[目 的]采用37℃恒温干燥箱风干羊膜,经液氮预冷后研磨制备新型羊膜粉,将新型羊膜粉与纤维蛋白胶结合制成羊膜-纤维蛋白（AM-FS）胶泥,利用体外细胞实验研究含不同浓度新型羊膜粉的AM-FS胶泥对兔角膜上皮细胞增殖的影响,结合在体动物实验研究AM-FS胶泥在兔重度眼表碱烧伤模型中的治疗效果。[方 法]制备新型羊膜粉:将洗净的新鲜羊膜置于37℃恒温干燥箱风干,液氮预冷后研磨成直径<260um的新型羊膜粉,γ射线灭菌;用生长因子芯片检测并比较新型羊膜粉及新鲜羊膜中bFGF、TGF β、NGF R、HGF、EGF的表达;根据保存条件将新型羊膜粉分为三组（室温保存组、4℃保存组、-20℃保存组）,每隔10d、20d、30d重复检测并比较生长因子的表达情况,探索新型羊膜粉的最佳保存方法。体外细胞实验:配制含不同新型羊膜粉浓度的AM-FS胶泥（65mg/ml、32mg/ml、16mg/ml、8mg/ml、4mg/ml、2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml、0.125mg/ml、Omg/ml）,将培养至第二代的兔角膜上皮细胞分别接种在铺有以上胶泥的细胞培养板底部,在显微镜下观察角膜上皮细胞的生长密度,结合CCK-8检测含不同浓度新型羊膜粉的AM-FS胶泥对细胞增殖的影响,筛选出AM-FS胶泥中羊膜粉的适宜添加浓度。动物实验:将在1mol/ml氢氧化钠溶液中浸泡过的圆形滤纸片（直径为15mm）置于兔角膜表面60s,随后立即用大量生理盐水迅速冲洗受损角膜及周围组织,制作兔重度眼表碱烧伤模型,按照治疗方式不同将模型动物随机分为四组（AM-FS胶泥组、新鲜羊膜移植组、纤维蛋白胶（FS）组、实验对照组）每组8只,术后7d、14d、21d、28d分别行裂隙灯显微镜检查、荧光素钠角膜染色观察角膜修复情况,第28d取材、固定角膜分别行HE染色,免疫组织化学法检测mcp-1、VEGF在角膜中的表达情况。[结 果]检测并比较新型羊膜粉及新鲜羊膜中bFGF、TGF β、NGF R、HGF、EGF的表达,结果显示:新型羊膜粉中NGF R的表达量低于新鲜羊膜,bFGF、HGF、EGF在新型羊膜粉中的表达量均高于新鲜羊膜,差异均具有统计学意义（adj.P.Val<0.05且logFC>0.263）,TGF β在新型羊膜粉的表达量与新鲜羊膜组相比差异无统计学意义（logFC<0.263）;将新型羊膜粉分别于室温、4℃、-20℃下保存,分别检测不同时间点各组生长因子表达量的变化,结果显示:10d、20d时各组新型羊膜粉中HGF、bFGF、EGF的表达均不低于新鲜羊膜组,且HGF、NGF R、bFGF、EGF在室温组的表达均不低于4℃组和-20℃组;30d时除HGF、bFGF外其余因子在各组的表达较新鲜羊膜组均下降,室温组中HGF、bFGF、EGF的表达均不低于4℃组和-20℃组,推测新型羊膜粉性质稳定可室温保存。体外细胞实验结果:培养72h后显微镜下观察到新型羊膜粉浓度为65mg/ml、32mg/ml、16mg/ml、8mg/ml、4mg/ml、2mg/ml 的 AM-FS 胶泥未见细胞生长;从1mg/ml浓度组观察到角膜上皮细胞的生长,1mg/ml到0.5mg/ml浓度组角膜上皮细胞增长最显着。CCK-8检测结果:吸光度（A）值随新型羊膜粉浓度降低而升高,新型羊膜粉浓度在0.25mg/ml处达到最高,但结果与0.5mg/ml组差异无统计学意义（P>0.05）,筛选新型羊膜粉浓度为0.25mg/ml的AM-FS胶泥进行动物实验。动物实验结果:AM-FS胶泥组在前2周降低角膜混浊度效果不明显（与实验对照组相比P>0.05）,其降低角膜混浊度的作用在后2周才出现（与实验对照组相比P<0.05）,第28d AM-FS胶泥组角膜混浊度与新鲜羊膜移植组差异无统计学意义（P<0.05）,FS组在各时间点减少碱烧伤后角膜混浊度的效果不显着（与实验对照组相比P>0.05）;各组兔碱烧伤后角膜新生血管面积均随时间而增加,但AM-FS胶泥组、新鲜羊膜移植组、FS组角膜新生血管面积在各时点均小于实验对照组（P<0.05）,虽然新鲜羊膜移植组角膜新生血管面积在第7d、21d、28d均小于AM-FS胶泥组（P<0.05）,但两组间新生血管面积各时间点的差值均较小（分别为0.34、0.38、0.88）。HE染色结果:AM-FS组和新鲜羊膜移植组的角膜结构完整,上皮排列趋于正常组织,角膜愈合优于FS组和实验对照组。免疫组化结果:VEGF在新鲜羊膜移植组的阳性表达较其余三组弱,AM-FS组和新鲜羊膜移植组中mcp-1的阳性表达程度相似。[结 论]37℃恒温风干新鲜羊膜并经液氮预冷后研磨制备的新型羊膜粉中活性细胞因子表达含量高,性质稳定可室温保存,其与纤维蛋白胶融合制备的AM-FS胶泥在兔眼表碱烧伤治疗中具有促进角膜上皮修复、抑制炎症及角膜新生血管生成的作用,并且使用便捷,为新型羊膜制品的研发提供新思路。
徐丽娟[5]（2020）在《吡柔比星通过诱导细胞凋亡和自噬抗兔结膜纤维化》文中指出目的:本研究首先在新西兰白兔眼中构建结膜纤维血管组织模型并进行鉴定,然后通过体内和体外实验,探讨吡柔比星（THP）对新西兰白兔结膜的抗纤维作用及机制。方法:本研究分为三部分:第一部分选择3只健康新西兰白兔作为未手术对照组,另外9只新西兰白兔采用角膜缘干细胞切除联合碱烧伤法构建结膜纤维血管组织模型,分别于造模后1月﹑2月和3月将模型与对照组﹑人原发翼状胬肉及人复发翼状胬肉进行形态学﹑组织学及组织化学特征（Vimentin,α-SMA,TGF-β1/2及collagen-I表达量）的比较,评估该模型应用于后续药物实验的可能性,并选择合适的造模时间节点。丝裂霉素C（mitomycin C,MMC）作为第二部分和第三部分的阳性对照药物。在第二部分实验中,首先用组织块法在体外培养原代兔结膜成纤维细胞（rabbit conjunctiva fibroblasts,RCF）,并用成纤维细胞特异性标记物Vimentin进行鉴定。将RCF用THP或MMC作用5分钟后洗脱,继续培养细胞24小时（蛋白印迹法[Western Blotting,WB]及Ad-m Cherry-GFP-LC3B转染试验）或48小时（其他细胞实验）。在观察时间点用荧光显微镜观察细胞形态变化,用化学发光法测定细胞活力,用流式细胞仪检测细胞周期及死亡细胞,用WB检测凋亡和自噬相关蛋白的表达,通过这一部分实验探讨THP对RCF增殖和凋亡的影响及相关作用机制,筛选出THP对RCF的有效作用浓度以应用于下一步动物实验。同时,我们观察了THP作用于体外培养人角膜上皮细胞（human cornea epithelial cells,HCECs）后细胞形态﹑凋亡及细胞周期分布情况。第三部分实验中我们首先选择了9只健康新西兰白兔行双眼构建结膜纤维血管模型。造模成功后行纤维血管组织切除,根据术中联合用药不同分为4组:DMEM组（阴性对照组）,不同浓度THP组（组2,组3）,MMC组（组4,阳性对照组）。术后随访3个月,比较各组结膜纤维血管组织复发情况及副作用,评估THP对预防结膜纤维血管组织切除术后复发的有效性及安全性。3个月后,获取手术部位结膜组织进行HE和免疫组化染色（cleaved caspase 3和LC3B）,评估THP对结膜组织结构完整性﹑细胞凋亡及自噬的影响。之后我们采用C57BL/6小鼠进一步评估了THP对角膜﹑心脏﹑肝脏和肾脏的毒性损害:选择3只作为未手术组（组1）,另外12只双眼角膜去上皮后用药物作用5分钟后洗脱,根据不同的药物分4组:DMEM组（阴性对照组,组2）,不同浓度THP组（组3,组4）,MMC组（组5,阳性对照组）,观察比较各组间角膜上皮愈合情况;1周后获取小鼠眼球﹑心脏﹑肝脏及肾脏并进行免疫组化鉴定,评估药物对上述组织的毒性损害。结果:本研究中所有造模的新西兰白兔眼中均形成了结膜纤维血管组织,该模型与人复发胬肉具有相似的以下特征:三角形外观,大量的胶原纤维沉积及上皮下新生血管形成,其中3个月模型相似度最高,因此被选择应用于后续药物的动物实验研究。在细胞水平,THP和MMC均呈浓度依赖性地抑制RCF增殖,将细胞周期阻滞于G0/G1期,其中THP对RCF的半数抑制浓度(IC50)为0.01 mg/m L,为MMC的1/20(IC50=0.2 mg/m L)。0.005 mg/m L THP通过上调Beclin 1,Atg 5/12复合体及LC3B激活了RCF自噬通路,而0.01 mg/m L THP通过激活线粒体途径的凋亡通路诱导RCF发生凋亡,并且以早期凋亡为主。THP和MMC均抑制HCECs增殖,诱导细胞凋亡,0.005和0.01 mg/m L THP诱导HCECs早期凋亡为主,而0.2 mg/m L MMC诱导细胞晚期凋亡为主,3组药物均将HCECs细胞周期阻滞于G2/M期。在动物实验中,0.005 mg/m L THP及0.01 mg/m L THP均与0.2 mg/m L MMC相似,未观察到新西兰白兔结膜纤维血管组织切除术后复发,而对照组术后复发率为44.4%（4/9）。0.005 mg/m L THP组未观察到明显副作用;但0.01 mg/m L THP组观察到2例（2/3）角膜混浊,1例（1/3）巩膜溶解;0.2 mg/m L MMC组观察到1例（1/3）角膜上皮延迟愈合。免疫组化结果显示:0.005 mg/m L THP组胶原纤维排列规则,结膜组织中出现显着增多的自噬细胞;而0.01 mg/m L THP组与0.2mg/m L MMC组胶原纤维排列稀疏,均在结膜组织中出现明显增多的凋亡细胞。在小鼠角膜损伤愈合过程中,0.005 mg/m L THP术后第一天愈合面积显着小于对照组,术后第二天完全愈合;0.01 mg/m L THP及0.2 mg/m L MMC术后1-4天愈合面积显着小于对照组,术后6-7天达到完全愈合。三组药物均未破坏角膜结构,但是0.01 mg/m L THP和0.2 mg/m L MMC组角膜基质中观察到了多形核细胞;三组药物均未对心脏﹑肝脏及肾脏产生毒性损害。结论:通过角膜缘干细胞切除联合碱烧伤法可以在新西兰白兔结膜中诱导形成纤维血管组织,该模型与人复发胬肉相似,未来可能可以应用于眼表纤维化疾病的基础和临床研究;在体外和体内实验中,THP表现出对RCF的抗纤维潜能:抑制成纤维细胞增殖并将细胞周期阻滞于G0/G1期,呈浓度依赖性地诱导细胞自噬﹑激活线粒体途径的凋亡通路;0.005 mg/m L THP可能具有有效且安全地预防兔结膜纤维血管组织切除术后复发的作用。
段朝野[6]（2019）在《角膜缘基质微环境细胞对体外培养的口腔黏膜上皮细胞的影响》文中研究说明目的:自体口腔黏膜上皮细胞移植（Autologous cultivated oral mucosal epithelial transplantation,COMET）是治疗角膜缘干细胞缺乏的重要方法,但是COMET术后周边部角膜新生血管的出现阻碍了其广泛地应用于临床。本研究将同种异体角膜缘基质微环境细胞（Limbal niche cells,LNCs）代替传统的小鼠源性的3T3细胞作为滋养细胞来培养口腔黏膜上皮细胞,从而降低口腔黏膜上皮细胞诱导新生血管生成的可能性。方法:将大鼠口腔黏膜上皮细胞与LNCs或3T3细胞共培养。对体外培养得到的口腔黏膜上皮细胞进行H&E染色及细胞免疫化学检测。通过RT-q PCR和Western Blotting分别在转录和翻译水平检测并比较各组口腔黏膜上皮细胞中血管生成相关因子的表达量。随后提取不同培养体系中上皮细胞培养基上清（条件培养基）对人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）进行刺激,通过检测接受了不同刺激的HUVECs的细胞活性及管腔形成情况进而再次比较不同培养体系所得到的口腔黏膜上皮细胞诱导新生血管产生的潜能。结果:无论选择LNCs还是3T3细胞作为滋养层,均可成功地在体外扩增培养出口腔黏膜上皮细胞。细胞免疫化学结果显示体外扩增得到的各组口腔黏膜上皮细胞中p63α,ABCG2,Ki67和CK3阳性细胞比例无明显差异。RT-q PCR和Western Blotting结果分别从基因和蛋白水平证明,与3T3组相比,LNC组所得到的口腔黏膜上皮细胞表达较少的b FGF和较多的PEDF和s Flt-1。此外,与3T3组相比,LNC组的口腔黏膜上皮细胞可降低HUVECs的细胞活性和形成管腔的能力。结论:LNCs可以代替3T3细胞作为体外扩增口腔黏膜上皮细胞的滋养细胞。以LNCs作为滋养细胞培养的口腔黏膜上皮细胞比传统方法培养的口腔黏膜上皮细胞具有较小的诱发新生血管的可能性。本研究为口腔黏膜上皮细胞培养体系的优化和COMET的更广泛的应用提供了实验基础。目的:当发生严重的双眼角膜缘干细胞缺乏（Limbal stem cell deficiency,LSCD）时眼表的重建是当务之急,自体口腔黏膜上皮细胞移植（Autologous cultivated oral mucosal epithelial transplantation,COMET）为眼表重建策略之一,它不受供体来源不足和长期进行免疫抑制治疗的限制。我们之前将角膜缘基质微环境细胞（Limbal niche cells,LNCs）作为滋养细胞建立的口腔黏膜上皮细胞（Oral mucosal epithelial cells,OMECs）体外培养体系显示出具有抑制术后周边角膜新生血管的潜能,本研究试图在动物模型中进一步验证这一作用。方法:建立日本大耳白兔LSCD模型,通过裂隙灯检查及H&E染色检验该模型建立是否成功。将OMECs悬液种植到去上皮羊膜上,并与LNCs或3T3细胞共培养。将培养的口腔黏膜上皮细胞片移植于模型眼（COMET-LNCs组或COMET-3T3组）,通过裂隙灯检查及免疫化学染色检比较各组眼表重建情况。通过RT-q PCR和Western Blotting比较各组角膜血管生成相关因子的表达情况。结果:造模后,模型眼出现角膜混浊、结膜化及新生血管化,且无恢复或减轻的倾向。各组动物在接受COMET后,眼表情况基本恢复透明,但是在COMET-3T3组的一个角膜发现轻度的新生血管形成,且COMET-3T3组角膜中可检测到CD34。与COMET-3T3组角膜相比,COMET-LNCs组的角膜表达高水平的PEDF和s Flt-1,但b FGF表达水平较低。结论:在动物实验中,以LNCs作为滋养细胞培养的口腔黏膜上皮细胞片可用于COMET手术,治疗效果肯定。而且具有比传统方式（以3T3细胞作为滋养细胞培养OMECs）更小的诱发术后新生血管的风险。
詹冬梅,杨红燕,哈玲芳,韩树梅[7]（2017）在《体外培养角膜缘干细胞重建眼表的实验研究》文中进行了进一步梳理目的探讨以去上皮羊膜为载体体外培养的角膜缘干细胞移植片治疗碱烧伤兔动物模型的效果。方法应用印迹细胞学方法选取完全性角膜缘干细胞缺陷的兔眼碱烧伤模型,另眼取材通过组织块联合酶消化法对角膜缘干细胞进行体外培养,鼠单克隆抗体AE5对其进行免疫细胞化学染色鉴定。对碱烧伤兔眼行植片移植,观察术后眼表状态变化。结果体外培养的兔角膜缘细胞在去上皮羊膜上生长良好,形成复层,AE5细胞免疫鉴定呈强阳性。不同移植片治疗碱烧伤兔眼,以去上皮羊膜为载体体外培养的角膜缘干细胞自体移植组和同种异体移植组,术后角膜病变总评分与去上皮羊膜移植组和对照组相比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论以去上皮羊膜为载体体外培养的角膜缘干细胞自体移植与同种异体移植在兔眼碱烧伤模型的眼表重建方面均显示出良好的效果。
赵云[8]（2016）在《骨髓间充质干细胞及其培养上清液对小鼠角膜碱烧伤修复作用的实验研究》文中认为目的:角膜碱烧伤是临床上常见的致盲性眼外伤。目前对于该病主要的有药物和手术两种治疗方法。这些治疗方法虽然取得了一定的疗效,但是在减轻碱烧伤后角膜混浊度,减轻角膜炎症反应和减少角膜新生血管方面的效果仍有待提高。骨髓间充质干细胞因其较强的增殖能力和多向分化潜能,加之潜在的抗炎和抗新生血管作用,成为了组织损伤疾病细胞治疗方法的理想种子细胞来源。骨髓间充质干细胞是否对于角膜碱烧伤具有一定的治疗作用,骨髓间充质干细胞培养上清液是否也具有治疗作用,目前国内外对于其在小鼠角膜碱烧伤方面的研究较少。本实验建立并验证了一种稳定可重复的小鼠角膜碱烧伤模型,并在此基础上探讨了应用结膜下注射骨髓间充质干细胞和骨髓间充质干细胞培养上清液点眼两种治疗方法对于角膜碱烧伤的治疗效果。方法:1.利用浸润于Na OH溶液的单层滤纸片贴附于小鼠角膜中央进行角膜碱烧伤,通过造模后裂隙灯检查眼表情况和HE染色检查,比较不同浓度Na OH溶液和不同滤纸片贴附时间下角膜碱烧伤的作用效果,从而选择一种相对稳定性强,一致性好的小鼠角膜碱烧伤动物模型制作方法。2.获得稳定可重复的小鼠角膜碱烧伤模型后,将实验小鼠分为三组:分别是碱烧伤后给予球结膜下注射0.1ml含1×106个BMSCs的悬浮液的骨髓间充质干细胞治疗组;碱烧伤后每天给予6次骨髓间充质干细胞培养上清液点眼组;以及碱烧伤后每天给予6次PBS液点眼组。结膜下注射骨髓间充质干细胞组为碱烧伤造模后进行注射,点眼组为每天6次点眼,直至处死小鼠。3.造模后裂隙灯观察眼表情况变化:造模后早期第1天、第3天、第5天、第7天利用荧光素染色法观察角膜上皮愈合情况;造模后第3天、第7天、第14天、第21天、第28天观察角膜新生血管情况;造模后第3天、第7天、第14天、第21天、第28天进行中央角膜混浊度评分,共观察4周。4.造模后第3天、7天、14天和28天,通过HE染色法观察角膜组织变化情况、炎症反应和新生血管生成情况,并对中央角膜的基质细胞进行计数。5.造模后第28天,通过免疫组织化学染色法检测角膜组织中Ki-67、α-SMA、MMP-9的表达。研究结果:1.利用浸润于1mol/L Na OH溶液的单层滤纸片贴附于小鼠中央角膜10s,可建立深浅适度、可重复性强的小鼠角膜碱烧伤动物模型。2.角膜碱烧伤后球结膜下注射骨髓间充质干细胞和角膜碱烧伤后骨髓间充质干细胞培养上清液点眼,都具有促进角膜上皮修复的作用。造模后1天、3天、5天、7天,应用PBS点眼的对照组角膜上皮缺损面积大于另外两个治疗组,差异具有统计学意义。3.角膜碱烧伤后球结膜下注射骨髓间充质干细胞和角膜碱烧伤后骨髓间充质干细胞培养上清液点眼,两种治疗方法都在一定程度上具有减少角膜新生血管生成的作用。造模后3天、7天、14天、21天、28天,应用PBS点眼的对照组新生血管面积大于另外两个治疗组,差异具有统计学意义。4.角膜碱烧伤后球结膜下注射骨髓间充质干细胞和角膜碱烧伤后骨髓间充质干细胞培养上清液点眼,两种治疗方法都具有改善角膜混浊程度的作用。造模后3天、7天、14天、21天、28天,应用PBS点眼的对照组角膜混浊度评分大于另外两个治疗组。5.通过HE染色观察显示,与两个治疗组相比,PBS液点眼组角膜上皮愈合较慢,新生角膜上皮层数较少,基质细胞排列较紊乱,炎性细胞浸润和新生血管生成相对较多。而碱烧伤后28天两个治疗组角膜基质层胶原排列较规则,无炎性细胞浸润,新生血管较少。角膜基质细胞计数显示球结膜下注射骨髓间充质干细胞组和骨髓间充质干细胞培养上清液点眼组细胞数量低于PBS液点眼组,差异具有统计学意义。6.免疫组织化学检查显示,PBS点眼组角膜基质层的α-SMA和MMP-9表达阳性度较高,而该组在角膜上皮层基底细胞的Ki-67阳性度低于另外两组。结论:结膜下注射骨髓间充质干细胞和骨髓间充质干细胞培养上清液点眼两种方法都对碱烧伤后的小鼠角膜具有修复作用。局部应用的骨髓间充质干细胞和其培养上清液能够改善碱烧伤后角膜透明度,促进角膜上皮愈合并能够相对抑制角膜新生血管的形成。
郭庆[9]（2017）在《羊膜对角膜损伤的治疗作用及其机理研究》文中研究指明眼表疾病是眼科的常见病、多发病,且复发率高,是眼科主要致盲疾病之一。对于各种眼表疾病所致角膜上皮缺损的治疗,目前以眼表面重建术效果最好,常采用的方法是自体或异体角膜移植术。但自体角膜缘取材有限,并有造成健眼角膜缘干细胞缺乏的风险。异体角膜要求新鲜,且存在来源不足、排斥反应等问题。由于羊膜有其特有的结构特点和促进组织修复的生物学特性,研究者们开始转向以羊膜为原材料治疗眼表疾病的研究中。在对羊膜移植的研究基础上,羊膜的研磨提取液—羊膜匀浆液保留了羊膜中的有效生物成分,在治疗眼表疾病方面取得了一定的进展,是一种较新的尝试。随着生物技术和其他相关技术的发展,以羊膜上皮细胞作为“种子细胞”构建组织工程角膜上皮,在眼表疾病治疗中亦显示出良好的发展前景。本文以羊膜为原材料,从动物实验、临床研究、细胞培养三个层面,研究羊膜移植片、羊膜匀浆液、羊膜上皮细胞对角膜上皮缺损的治疗作用及作用机制,为解决眼表重建材料缺乏及严重眼表疾病的治疗提供新的方法和新的理论依据。首先建立兔角膜上皮损伤的动物模型,行以羊膜移植术,以观察羊膜对动物角膜伤口愈合的作用。结果发现,羊膜移植组与对照组比较,角膜上皮愈合加快,显微形态学观察显示,实验组细胞排列水平、细胞形态、炎症细胞数等方面较对照组均明显改善。其次,在动物实验的基础上,对不同病因所致的眼表上皮缺损患者24人（25眼）,行以羊膜移植术,该临床研究发现:25只眼中21只眼眼表面得以重建,视力有不同程度的提高。再生的角膜上皮透明,结膜组织稳定、无感染。平均观察28.3周,所有21只眼无复发,另外3只眼因并发症致手术失败。再次,以上皮细胞缺损的兔角膜作为研究对象,观察不同浓度羊膜匀浆液对角膜上皮细胞增殖的作用。结果发现,羊膜匀浆液对兔角膜上皮细胞增殖和修复具有明显的促进作用,且这种促进作用在一定范围内随浓度增加而增强,即角膜上皮细胞的增殖率对羊膜匀浆液具有浓度依从性。羊膜匀浆组与羊膜移植组比较作用效果相同,但可避免手术并发症。最后,进行羊膜及角膜上皮细胞培养以及二者共同培养的细胞学研究。结果显示:羊膜上皮细胞在原代培养2 h后开始贴壁生长。细胞呈多角形、不规则形,排列呈铺路石样。体外可连续传45代,CK3、CK18、CK19呈阳性表达。流式细胞仪检测CK3、CK18、CK19表达率分别为40.84±3%,47.51±2%和32.41±3%。角膜上皮细胞在培养的第3天时开始爬出,呈多角形,排列均匀。经诱导培养后的羊膜上皮细胞呈多角形、扁平状,细胞体积增大。流式细胞学检测CK3表达率为76.40±0.3%,与诱导前相比有显着差异（P<0.05）,具有统计学意义。综上所述,本文针对羊膜进行了动物实验、临床研究、细胞培养三个层面的研究工作,实验和临床研究均证明了羊膜对角膜上皮缺损的修复具有促进作用,为解决眼表重建材料缺乏及严重眼表疾病的治疗提供了新的途径和方法。
袁晔[10]（2015）在《兔骨髓间充质干细胞膜片对角膜化学烧伤的治疗作用与机制研究》文中提出研究目的:一.探讨体外分离培养兔骨髓间充质干细胞的可行性;构建骨髓间充质细胞膜片;观察细胞膜片超微结构;二.探讨骨髓间充质干细胞培养基上清液对体外培养角膜基质细胞生长的影响,分析其产生影响的原因;三.探讨骨髓间充质干细胞膜片对兔角膜化学烧伤动物的治疗效果,检测治疗过程中相关细胞因子的表达水平;探讨细胞膜片发挥治疗作用的机制。研究方法:一.贴壁筛选分离和体外培养幼兔骨髓细胞,对所得细胞进行细胞传代培养、纯化;倒置显微镜下细胞形态学观察,照相,对比不同浓度条件接种细胞的培养效果;细胞诱导分化试验行成脂和成骨诱导并鉴定,观察骨髓间充质干细胞的分化能力;细胞表面标记CD29、CD44、CD45检测鉴定细胞,观察所获细胞其纯度;检测骨髓间充质干细胞克隆形成能力;维生素C诱导体外培养兔骨髓间充质干细胞多层生长,构建骨髓间充质干细胞细胞膜片,HE染色行细胞膜片组织学鉴定。扫描电子显微镜、透射电子显微镜观察培养好的BMSCs膜片,观察组织成分、细胞状态;ELISA方法检测不同浓度细胞体外培养液上清液中IL-2、MMP-9、VEGF、IL-10、TSP-1和TSG-6等细胞因子表达量。二.兔角膜基质细胞分离和培养至对数生长期,应用无血清DMEM（Serum-free FCM）、含10%FBS DMEM的培养液（FCM）和BMSC上清液（MSC medium）培养角膜基质细胞,应用MTT、划痕实验、细胞周期检测三种培养液的影响,ELISA检测三种条件下IL-2、IL-10、TSP-1和TSG-6四种细胞因子表达量。三.新西兰大白兔72只,成功建立角膜化学烧伤模型后,随机分为实验组、对照组,术后7天、14天、21天,应用裂隙灯显微镜观察上皮完整性、基质透明性及血管新生情况,观察拍照后每个时间点随机按3只实验动物一组取材,分别进行2westernblot检测vegf,mmp-9,il-2和s100a8等因子,rt-pcr、elisa检测egf、mmp-9、s100a8、il-2、tsp-1、tsg-6和il-10等因子、组织切片行he染色和免疫荧光检测细胞因子表达。研究结果:第一部分1.1角膜间充质干细胞成功构建细胞膜片;bmscs原代培养24h全量换液效果佳。第三代细胞,获得较纯化的bmscs,细胞边缘折光性好,可用于后续试验;成脂实验部分,bmscs经油红染色,细胞内无脂滴形成,染色结果为为阴性;成骨诱导实验部分,所得细胞传代至第三代,培养过程应用成骨细胞诱导剂,至21天茜素红染色显微镜下观察:细胞呈多层生长,排列次序重叠,单个细胞的梭形形态消失,多呈多角形形态,细胞间质内大量钙质沉积,茜素红染色呈钙化结节,染色结果为阳性;流式细胞仪检测bmscscd29的阳性率为93.7%,cd44为93.4%,cd45阳性率为0.32%。2×105细胞/孔接种细胞,膜片表面未形成沉积物,可清晰观察到细胞形态,细胞边缘折光性强,形成的细胞膜片活力旺盛;1.2透射电镜（tem）观察见胞膜完整,可见细胞突触及分泌泡,胞质丰富有大量胶原束,说明细胞状态良好。il-2、mmp-9和vegf在2×105接种密度的表达量低于其他细胞接种密度;il-10、tsp-1和tsg-6在2×105接种密度的表达量高于其他细胞接种密度。第二部分Fcm促使细胞的迁移明显,促使细胞的迁移,mscmedium和serum-freefcm与fcm相比抑制角膜基质细胞迁移,mscmedium与fcm相比显着影响基质细胞的增殖。elisa检测结果mscmedium中细胞因子il-10,tsp-1和tsg-6表达量明显高于fcm和serum-freefcm中细胞因子的表达量。第三部分3.1裂隙灯观察:实验组术后第7天可见角膜平滑,已完成上皮化;术后第14天可见角膜透明度良好,无瘢痕组织形成;术后第21天实验组bmsc观察结果,可见角膜已完全透明,眼表光滑,上皮完整,治疗效果明显。3.2组织病理学观察结果:实验组术后第7天可见细胞膜片比较疏松,角膜已完成上皮化;第14天细胞膜片已基本与角膜基质整合;第21天术后细胞膜片已完全与角膜基质整合。3.3 Westernblot实验结果:VEGF,MMP-9,IL-2和S100A8因子在第7天,第14天和第21天时正常组和BMSC处理组表达量很低,但是对照组中表达量明显增强,且随着时间表达增强;3.4 RT-PCR检测细胞因子表达结果:在正常的兔角膜基质各基因的表达量很低;在对照组（板层去除角膜创伤）中VEGF、MMP-9、S100A8和IL-2均明显升高;BMSC组与对照组相比,TSP-1、TSG-6和IL-10的表达变化有显着增多。3.5免疫荧光检测细胞因子表达:随着时间的延长,对照组角膜中侵润的CD4逐渐增多明显高于MSC处理组和正常组;对照组角膜中IL-2、MMP-9表达量均逐渐增多,明显高于MSC处理组和正常组;3.6 ELISA检测细胞因子结果:EGF,MMP-9,S100A8和IL-2在对照组高表达,且3周时表达量最高;TSP-1、TSG-6和IL-10在BMSCs膜片处理的实验组表达量较高,有效地抑制血管化,炎症和瘢痕组织。结论:体外构建BMSCs细胞膜片对角膜化学烧伤治疗作用明显,促进角膜上皮化,维持角膜基质透明,有效地抑制血管化,炎症和瘢痕组织。作用机制可能与上调TSP-1、TSG-6和IL-10表达,下调VEGF、MMP-9、S100A8和IL-2表达有关。
二、培养角膜缘干细胞羊膜移植治疗碱烧伤动物的实验研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、培养角膜缘干细胞羊膜移植治疗碱烧伤动物的实验研究（论文提纲范文）
（1）含LSCs的原代角膜缘上皮细胞片自体移植对犬大面积角膜损伤的疗效研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 角膜缘干细胞研究进展 |
| 1 角膜缘解剖结构 |
| 2 角膜缘干细胞概述 |
| 3 角膜缘干细胞的培养 |
| 3.1 培养方法 |
| 3.2 培养基的选择 |
| 3.3 饲养层细胞 |
| 3.4 培养载体 |
| 3.5 气液交界面培养 |
| 4 角膜缘干细胞的标志物 |
| 4.1 ΔNp63α |
| 4.2 C/EBPδ和Bmil |
| 4.3 ABCG2和Noch-1 |
| 4.4 细胞角蛋白 |
| 第二章 角膜缘干细胞缺乏症的研究进展 |
| 1 角膜缘干细胞缺乏症的病因 |
| 2 角膜缘干细胞缺乏症的临床表现 |
| 3 角膜缘干细胞缺乏症的诊断方法 |
| 3.1 临床表现及裂隙灯检查 |
| 3.2 印迹细胞学检查 |
| 3.3 活体成像技术 |
| 4 角膜缘干细胞缺乏症治疗的研究进展 |
| 4.1 CLET |
| 4.2 CLAU |
| 4.3 SLET |
| 4.4 COMET |
| 5 试验目的与意义 |
| 参考文献 |
| 第二部分 试验研究 |
| 第一章 含LSCs犬原代角膜缘上皮细胞植片的构建与鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要药品和试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 主要试剂的配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 犬羊膜的采集、保存以及处理 |
| 2.2 犬LSCs的分离培养 |
| 2.3 犬原代角膜缘上皮细胞的超微结构观察 |
| 2.4 羊膜组织学观察 |
| 2.5 犬原代角膜缘上皮细胞相关基因表达的鉴定 |
| 2.6 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 羊膜去上皮层效果的鉴定 |
| 3.2 犬角膜缘上皮细胞的培养 |
| 3.3 犬原代角膜缘上皮细胞的超微结构 |
| 3.4 犬原代角膜缘上皮细胞相关基因的表达情况 |
| 4 讨论 |
| 第二章 含LSCs犬原代角膜缘上皮细胞片自体移植对LSCD疾病模型犬疗效的临床观察 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要药品和试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 LSCD疾病模型犬的制作 |
| 2.2 手术治疗 |
| 2.3 术后护理 |
| 2.4 裂隙灯检查 |
| 2.5 眼表临床检查 |
| 2.6 数据分析 |
| 3.1 临床表现 |
| 3.2 裂隙灯检查结果 |
| 3.3 角膜临床评分结果 |
| 3.4 眼表临床检查结果 |
| 3.5 印记细胞学检查结果 |
| 4 讨论 |
| 第三章 含LSCs犬原代角膜缘上皮细胞片自体移植对角膜的组织结构及相关因子的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 试剂配制 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 实验动物的分组 |
| 2.2 术前准备、麻醉、保定与消毒 |
| 2.3 手术采样 |
| 2.4 角膜组织学观察 |
| 2.5 免疫组化染色法检测ABCG2和p63的表达 |
| 2.6 qPCR检测IL-1β、VEGF和FGF的表达水平 |
| 2.7 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 角膜组织学观察结果 |
| 3.2 免疫组化染色观察术后角膜中ABCG2和p63的表达情况 |
| 3.3 手术治疗后角膜中细胞因子的mRNA相对表达量变化 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（2）甘草酸二钾纳米胶束调控HMGB1信号通路治疗角膜化学伤及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 第一章 综述 |
| 1.1 角膜化学伤 |
| 1.1.1 定义和分类 |
| 1.1.2 危害和并发症 |
| 1.1.3 分类系统 |
| 1.1.4 病程阶段和眼部变化 |
| 1.1.5 治疗手段 |
| 1.1.5.1 用药治疗 |
| 1.1.5.2 手术治疗 |
| 1.2 瑞巴派特 |
| 1.2.1 性质 |
| 1.2.2 药理作用与临床应用 |
| 1.2.2.1 保护胃黏膜,促进胃溃疡的愈合 |
| 1.2.2.2 提高幽门螺旋杆菌根除率 |
| 1.2.2.3 胃炎及功能性消化不良 |
| 1.2.2.4 非甾体抗炎药引起的胃肠道损伤 |
| 1.2.2.5 抗癌活性 |
| 1.2.2.6 溃疡性结肠炎 |
| 1.2.2.7 干眼症 |
| 1.2.3 药动学特征 |
| 1.2.4 不良反应 |
| 1.2.5 瑞巴派特药物传递系统现状 |
| 1.3 眼部纳米给药系统的研究现状 |
| 1.3.1 水凝胶 |
| 1.3.2 脂质体 |
| 1.3.3 纳米悬浮液 |
| 1.3.4 纳米乳液 |
| 1.3.5 纳米胶束 |
| 1.4 HMGB1信号通路 |
| 1.4.1 HMGB1及其信号通路的研究进展 |
| 1.4.2 HMGB1在碱烧伤及其并发症中的作用 |
| 1.4.3 甘草酸二钾是HMGB1 的特异性抑制剂 |
| 第二章 甘草酸二钾纳米胶束滴眼液的制备及评价 |
| 2.1 实验材料和仪器 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验试剂与材料 |
| 2.1.3 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 甘草酸二钾临界胶束浓度的测定 |
| 2.2.2 瑞巴派特液相方法的建立 |
| 2.2.3 甘草酸二钾-瑞巴派特纳米胶束滴眼液的构建与优化 |
| 2.2.4 甘草酸二钾-瑞巴派特纳米胶束滴眼液的表征 |
| 2.2.4.1 包封率测定 |
| 2.2.4.2 外观及微观特征 |
| 2.2.4.3 粒径、粒径分布与电位的测定 |
| 2.2.5 储存稳定性考察 |
| 2.2.6 安全性考察 |
| 2.2.6.1 在体兔眼刺激性实验 |
| 2.2.6.2 组织病理学考察 |
| 2.2.6.3 鸡胚尿囊膜-台盼蓝染色实验(CAM-TBS) |
| 2.2.7 在体小鼠角膜吸收的考察 |
| 2.2.8 数据分析 |
| 2.3 实验结果与讨论 |
| 2.3.1 甘草酸二钾临界胶束浓度的测定 |
| 2.3.2 瑞巴派特液相方法的建立 |
| 2.3.3 甘草酸二钾-瑞巴派特纳米胶束滴眼液的构建与优化 |
| 2.3.4 甘草酸二钾-瑞巴派特纳米胶束滴眼液的表征 |
| 2.3.4.1 甘草酸二钾-瑞巴派特纳米胶束滴眼液的外观及微观特征 |
| 2.3.4.2 甘草酸二钾-瑞巴派特纳米胶束滴眼液的粒径、粒径分布与电位 |
| 2.3.5 储存稳定性考察 |
| 2.3.6 安全性考察 |
| 2.3.6.1 在体兔眼刺激性实验 |
| 2.3.6.2 组织病理学考察 |
| 2.3.6.3 鸡胚尿囊膜-台盼蓝染色实验 |
| 2.3.7 在体小鼠角膜吸收的考察 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 甘草酸二钾纳米胶束在H_2O_2诱导人角膜上皮细胞氧化应激损伤中的作用 |
| 3.1 实验材料和仪器 |
| 3.1.1 实验细胞 |
| 3.1.2 实验试剂与材料 |
| 3.1.3 实验仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 甘草酸二钾-瑞巴派特纳米胶束滴眼液的细胞毒性评价 |
| 3.2.1.1 短时间细胞毒性 |
| 3.2.1.2 长时间细胞毒性 |
| 3.2.2 甘草酸二钾-瑞巴派特纳米胶束滴眼液对HCECs细胞迁移的影响 |
| 3.2.3 甘草酸二钾-瑞巴派特纳米胶束滴眼液对过氧化氢诱导下HCECs内氧化应激水平的影响 |
| 3.2.3.1 H_2O_2诱导HCECs产生氧化应激模型的建立 |
| 3.2.3.2 活性氧(ROS)的测定 |
| 3.2.3.3 超氧化物歧化酶(SOD)含量的测定 |
| 3.2.3.4 丙二醛(MDA)的测定 |
| 3.2.4 数据分析 |
| 3.3 实验结果与讨论 |
| 3.3.1 甘草酸二钾-瑞巴派特纳米胶束滴眼液的细胞毒性评价 |
| 3.3.2 甘草酸二钾-瑞巴派特纳米胶束对HCECs细胞迁移的影响 |
| 3.3.3 甘草酸二钾-瑞巴派特纳米胶束对H_2O_2诱导HCECs氧化应激的影响 |
| 3.3.3.1 H_2O_2诱导HCECs产生氧化应激模型的建立 |
| 3.3.3.2 甘草酸二钾-瑞巴派特纳米胶束对H_2O_2诱导HCECs氧化应激的作用 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 甘草酸二钾纳米胶束调控HMGB1信号通路治疗小鼠角膜碱烧伤 |
| 4.1 实验材料和仪器 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 实验试剂与材料 |
| 4.1.3 实验仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 碱烧伤小鼠模型的建立 |
| 4.2.1.1 动物分组 |
| 4.2.1.2 模型建立 |
| 4.2.2 小鼠眼前节裂隙灯观察 |
| 4.2.2.1 小鼠角膜荧光素钠染色 |
| 4.2.2.2 小鼠角膜虎红染色 |
| 4.2.3 小鼠眼球浑浊程度和新生血管临床评分 |
| 4.2.4 小鼠角膜敏感度测试 |
| 4.2.5 小鼠角膜新生血管观察 |
| 4.2.6 组织病理学检查角膜组织和炎症细胞 |
| 4.2.7 小鼠角膜细胞凋亡检测(TUNEL染色) |
| 4.2.8 ELISA检测炎症因子 |
| 4.2.9 蛋白质印迹法(Western blotting,WB) |
| 4.2.9.1 小鼠角膜蛋白提取与处理 |
| 4.2.9.2 聚丙烯酰胺凝胶的制备 |
| 4.2.9.3 电泳 |
| 4.2.9.4 转膜 |
| 4.2.9.5 免疫反应与化学发光 |
| 4.3 实验结果与讨论 |
| 4.3.1 小鼠角膜上皮损伤修复过程的考察 |
| 4.3.1.1 小鼠角膜荧光素钠染色 |
| 4.3.1.2 小鼠角膜虎红染色 |
| 4.3.2 小鼠眼球浑浊程度和新生血管临床评分 |
| 4.3.3 小鼠角膜敏感度测试 |
| 4.3.4 小鼠角膜新生血管观察 |
| 4.3.5 组织病理学检查角膜组织和炎症细胞 |
| 4.3.6 小鼠角膜细胞凋亡检测 |
| 4.3.7 ELISA检测炎症因子 |
| 4.3.8 蛋白质印迹法 |
| 4.4 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录 |
（3）维生素C对小鼠角膜碱烧伤修复作用的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验主要试剂 |
| 1.1.3 实验仪器、设备 |
| 1.1.4 主要试剂配制 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 小鼠角膜碱烧伤模型的制作 |
| 1.2.2 实验分组 |
| 1.2.3 治疗方法 |
| 1.3 碱烧伤后眼前段观察 |
| 1.3.1 角膜上皮损伤测定 |
| 1.3.2 角膜新生血管情况 |
| 1.3.3 角膜混浊情况 |
| 1.4 组织病理学观察 |
| 1.4.1 苏木精-伊红染色(HE染色) |
| 1.4.2 免疫组织化学染色 |
| 1.5 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 维生素C可促进角膜碱烧伤后角膜上皮愈合 |
| 2.2 维生素C抑制碱烧伤后角膜新生血管的生成 |
| 2.3 维生素C减轻碱烧伤后角膜混浊程度 |
| 2.4 维生素C促进碱烧伤后角膜缘干细胞增殖分化 |
| 2.5 维生素C能减轻碱烧伤后角膜的炎症反应 |
| 2.6 维生素C抑制碱烧伤后角膜基质CD31 和α-SMA的表达 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 综述 眼化学伤的临床治疗进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间撰写文章 |
| 致谢 |
（4）羊膜-纤维蛋白胶泥的制备及其治疗兔重度眼表碱烧伤的实验研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 羊膜在眼表疾病治疗的研宄进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（5）吡柔比星通过诱导细胞凋亡和自噬抗兔结膜纤维化（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略语及中英文对照 |
| 引言 |
| 第一部分 用角膜缘干细胞切除联合碱烧伤法在新西兰白兔眼中建立结膜纤维血管模型 |
| 1 前言 |
| 2 材料及方法 |
| 2.1 主要试剂及配置 |
| 2.2 主要仪器设备 |
| 2.3 动物实验 |
| 2.4 人翼状胬肉标本的采集 |
| 2.5 制备石蜡切片 |
| 2.6 HE染色 |
| 2.7 免疫组化染色 |
| 2.8 免疫荧光 |
| 2.9 阅片与数据分析 |
| 2.10 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 角膜缘干细胞切除联合碱烧伤法成功地诱导了新西兰白兔结膜纤维血管组织(conjunctival fibro-vascular tissue[CFVT])形成 |
| 3.2 兔结膜纤维血管组织具有与人复发胬肉相似的组织化学特征 |
| 3.3 术后观察 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 吡柔比星诱导体外培养原代兔结膜成纤维细胞凋亡和自噬 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂及配置 |
| 2.2 主要仪器设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 组织块法成功培养出原代兔结膜成纤维细胞 |
| 3.2 THP抑制RCF增殖,将细胞周期阻滞于G0/G1期 |
| 3.3 THP对 RCF侵袭及迁移能力的影响 |
| 3.4 THP诱导RCF死亡,激活线粒体介导的凋亡通路 |
| 3.5 THP诱导RCF自噬 |
| 3.6 THP抑制HCECs增殖,诱导其凋亡并将细胞阻滞于G2/M期 |
| 4 讨论 |
| 第三部分 吡柔比星预防新西兰白兔结膜纤维血管组织切除术后复发 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂及配置 |
| 2.2 主要仪器设备 |
| 2.3 动物实验 |
| 2.4 制备石蜡切片 |
| 2.5 HE染色 |
| 2.6 免疫组化染色 |
| 2.7 阅片分析 |
| 2.8 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 THP减少兔结膜纤维血管组织切除术后复发 |
| 3.2 THP诱导兔结膜发生自噬和凋亡 |
| 3.3 0.005 mg/mL THP未损伤手术周围角膜缘干细胞 |
| 3.4 THP对 C57BL/6 小鼠角膜上皮愈合功能的影响 |
| 3.5 THP对角膜﹑心脏﹑肝脏和肾脏的毒性评估 |
| 4 讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 综述 结膜术后纤维化机制及治疗 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在读期间所取得的科研成果 |
（6）角膜缘基质微环境细胞对体外培养的口腔黏膜上皮细胞的影响（论文提纲范文）
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分:大鼠角膜缘基质微环境细胞可支持大鼠口腔黏膜上皮细胞的生长并改变其生物学性状 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 第二部分:角膜缘基质微环境细胞对口腔黏膜上皮细胞移植后新生血管生成影响的动物实验研究 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 主要缩略语英汉对照表 |
| 附录:博士期间发表论文 |
| 致谢 |
（7）体外培养角膜缘干细胞重建眼表的实验研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物: |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 眼表碱烧伤兔动物模型的建立: |
| 1.2.2 实验分组: |
| 1.2.3 制备去上皮人羊膜载体: |
| 1.2.4 兔角膜缘组织取材、体外培养及鉴定 |
| 1.2.4. 1 兔角膜缘组织取材: |
| 1.2.4. 2 兔角膜缘干细胞原代培养: |
| 1.2.4. 3 兔角膜缘干细胞传代培养: |
| 1.2.4. 4 角膜缘干细胞鉴定及形态学观察: |
| 1.2.5 移植重建眼表 |
| 1.2.5. 1 手术步骤: |
| 1.2.5. 2 术后处理和观察: |
| 1.3 统计学方法: |
| 2 结果 |
| 2.1 成功建立眼表碱烧伤动物模型: |
| 2.2 兔角膜缘干细胞的原代和传代培养: |
| 2.3 角膜缘干细胞形态学及鉴定: |
| 2.4 裂隙灯检查结果: |
| 2.5 各组角膜混浊指数评分、角膜新生血管指数评分及角膜上皮荧光素染色指数评分结果:见表1。 |
| 2.6 各组角膜病变总评分(角膜混浊指数评分、角膜新生血管指数评分及角膜上皮荧光素染色指数评分之和)比较: |
| 3 讨论 |
（8）骨髓间充质干细胞及其培养上清液对小鼠角膜碱烧伤修复作用的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、小鼠角膜碱烧伤模型的建立方法和验证 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 试剂及耗材 |
| 1.1.3 实验所需的主要试剂及溶液的配制 |
| 1.1.4 主要仪器设备 |
| 1.1.5 实验方法 |
| 1.1.6 统计学方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 小鼠全身和眼部的一般情况 |
| 1.2.2 小鼠角膜碱烧伤模型的建立 |
| 1.2.3 小鼠角膜碱烧伤模型的验证 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 角膜碱烧伤模型的选择 |
| 1.3.2 角膜碱烧伤的损伤机制 |
| 1.4 小结 |
| 二、结膜下注射骨髓间充质干细胞和骨髓间充质干细胞培养上清液点眼对碱烧伤后小鼠角膜的影响 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 骨髓间充质干细胞和骨髓间充质干细胞培养上清液 |
| 2.1.3 试剂及耗材 |
| 2.1.4 实验所需的主要试剂及溶液的配制 |
| 2.1.5 主要仪器设备 |
| 2.1.6 实验方法 |
| 2.1.7 统计学方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 结膜下注射骨髓间充质干细胞和骨髓间充质干细胞培养上清液点眼有助于角膜上皮愈合 |
| 2.2.2 结膜下注射骨髓间充质干细胞和骨髓间充质干细胞培养上清液点眼有助于碱烧伤后角膜新生血管的生成 |
| 2.2.3 结膜下注射骨髓间充质干细胞和骨髓间充质干细胞培养上清液点眼有助于减轻角膜碱烧伤后角膜混浊 |
| 2.2.4 HE染色检查角膜组织结构变化 |
| 2.2.5 免疫组织化学染色检查角膜组织结构变化 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 间充质干细胞的主要特征 |
| 2.3.2 骨髓间充质干细胞对碱烧伤后早期角膜上皮愈合的影响 |
| 2.3.3 骨髓间充质干细胞对碱烧伤后角膜炎症反应的影响 |
| 2.3.4 骨髓间充质干细胞对碱烧伤后角膜新生血管的影响 |
| 2.3.5 骨髓间充质干细胞的应用途径 |
| 2.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 骨髓间充质干细胞在角膜损伤修复方面的研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）羊膜对角膜损伤的治疗作用及其机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 课题来源 |
| 1.2 课题背景及研究的目的和意义 |
| 1.3 羊膜的特性 |
| 1.3.1 羊膜的组织学特性 |
| 1.3.2 羊膜的免疫学特性 |
| 1.3.3 羊膜的生物学特性 |
| 1.4 羊膜的研究现状及进展 |
| 1.4.1 羊膜的历史应用 |
| 1.4.2 羊膜的基础研究 |
| 1.5 羊膜在眼科的应用及研究进展 |
| 1.5.1 修复角膜上皮缺损 |
| 1.5.2 修复结膜上皮缺损及异常增生 |
| 1.5.3 治疗角巩膜溃疡及穿孔 |
| 1.5.4 角膜移植的辅助性治疗 |
| 1.5.5 眼部复杂化学烧伤的治疗 |
| 1.5.6 青光眼手术中的应用 |
| 1.5.7 屈光手术中的应用 |
| 1.5.8 其他眼病的治疗 |
| 1.6 羊膜在组织工程学中的应用 |
| 1.7 主要研究内容 |
| 第2章 实验材料及方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 羊膜植片的筛选 |
| 2.1.2 实验动物的筛选 |
| 2.1.3 临床治疗病人筛选 |
| 2.1.4 实验试剂 |
| 2.1.5 手术器械 |
| 2.1.6 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 羊膜植片的制备及保存 |
| 2.2.2 羊膜匀浆的制备及保存 |
| 2.2.3 羊膜匀浆蛋白含量测定及实验溶液制备 |
| 2.2.4 病理标本的取材制备 |
| 2.2.5 羊膜上皮细胞原代及传代培养 |
| 2.2.6 羊膜上皮细胞的检测 |
| 2.2.7 角膜上皮细胞原代培养 |
| 2.2.8 羊膜上皮细胞与角膜上皮细胞共同培养 |
| 2.2.9 诱导后羊膜上皮细胞检测 |
| 2.3 统计学方法 |
| 第3章 羊膜移植治疗兔角膜损伤的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验分组及动物模型的建立 |
| 3.2.1 实验分组 |
| 3.2.2 角膜损伤模型的建立 |
| 3.3 手术方式及观察指标 |
| 3.4 羊膜移植对兔角膜损伤愈合作用的比较分析 |
| 3.4.1 眼部炎症反应的比较分析 |
| 3.4.2 角膜上皮愈合时间的比较分析 |
| 3.5 羊膜移植术后显微形态学观察比较 |
| 3.5.1 光学显微镜观察比较 |
| 3.5.2 透射电镜观察比较 |
| 3.6 羊膜移植对角膜伤口愈合的影响 |
| 3.6.1 角膜伤口的愈合方式 |
| 3.6.2 生长因子、胶原纤维对角膜伤口愈合的影响 |
| 3.6.3 羊膜的作用及作用机理 |
| 3.6.4 实验结果及机理分析 |
| 3.7 本章小结 |
| 第4章 羊膜移植治疗人眼表疾病的临床研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 临床资料与手术方式 |
| 4.2.1 临床资料 |
| 4.2.2 羊膜植片的取材 |
| 4.2.3 手术方式 |
| 4.2.4 术后处理 |
| 4.3 临床愈后 |
| 4.4 典型病例报告 |
| 4.4.1 病例 1 |
| 4.4.2 病例 7 |
| 4.4.3 病例 19 |
| 4.5 羊膜移植的临床治疗作用及机理分析 |
| 4.5.1 临床愈后机理分析 |
| 4.5.2 手术适应症及手术方式的选择 |
| 4.5.3 术后并发症的预防和处理 |
| 4.5.4 影响愈后的相关因素分析 |
| 4.5.5 羊膜移植术临床应用的限制和不足 |
| 4.6 本章小结 |
| 第5章 羊膜匀浆液治疗兔角膜损伤的研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 羊膜匀浆液对兔角膜上皮细胞增殖作用的研究 |
| 5.2.1 实验分组及动物模型制备 |
| 5.2.2 角膜裸区面积的观察测量及细胞增殖率测定 |
| 5.2.3 各组生长速度的比较 |
| 5.3 羊膜匀浆液与羊膜移植对兔角膜损伤修复作用的比较研究 |
| 5.3.1 实验分组及动物模型制备 |
| 5.3.2 角膜裸区面积的观察测量及细胞增殖率测定 |
| 5.3.3 各组生长速度的比较 |
| 5.4 羊膜匀浆液的作用机理及应用前景分析 |
| 5.4.1 羊膜匀浆液的作用及作用机理 |
| 5.4.2 实验结果及机理分析 |
| 5.4.3 羊膜匀浆液在眼科疾病中的应用 |
| 5.4.4 羊膜匀浆液的应用优势及前景 |
| 5.5 本章小结 |
| 第6章 羊膜上皮细胞体外培养及诱导分化研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 羊膜和角膜上皮细胞培养的形态变化及鉴定 |
| 6.2.1 羊膜上皮细胞形态变化 |
| 6.2.2 羊膜上皮细胞的鉴定 |
| 6.2.3 角膜上皮细胞的形态变化 |
| 6.2.4 角膜细胞诱导的羊膜上皮细胞形态变化及鉴定 |
| 6.3 羊膜和角膜上皮细胞培养的相关因素分析 |
| 6.3.1 实验材料选择相关性分析 |
| 6.3.2 羊膜上皮细胞的培养分析 |
| 6.3.3 羊膜上皮细胞的鉴定分析 |
| 6.3.4 角膜上皮细胞的培养分析 |
| 6.3.5 羊膜上皮细胞的诱导分化分析 |
| 6.3.6 本章实验的不足 |
| 6.4 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文及其他成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）兔骨髓间充质干细胞膜片对角膜化学烧伤的治疗作用与机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 兔骨髓间充质干细胞的体外培养与细胞膜片的构建与鉴定 |
| 摘要 |
| 实验一 BMSCs的体外培养和鉴定 |
| 附图一 |
| 实验二细胞膜片的制备与鉴定 |
| 附图二 |
| 参考文献 |
| 第二部分 兔BMSC培养液上清液对角膜基质细胞影响的体外实验 |
| 摘要 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 附图三 |
| 参考文献 |
| 第三部分BMSC sheet对化学烧伤角膜的治疗作用与机制研究 |
| 摘要 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图四 |
| 参考文献 |
| 综述一 |
| 参考文献 |
| 综述二 |
| 参考文献 |
| 附件 |
| 致谢 |
四、培养角膜缘干细胞羊膜移植治疗碱烧伤动物的实验研究（论文参考文献）
- [1]含LSCs的原代角膜缘上皮细胞片自体移植对犬大面积角膜损伤的疗效研究[D]. 吴艳菊. 扬州大学, 2021
- [2]甘草酸二钾纳米胶束调控HMGB1信号通路治疗角膜化学伤及其机制研究[D]. 张凡. 青岛科技大学, 2021(01)
- [3]维生素C对小鼠角膜碱烧伤修复作用的实验研究[D]. 陈祖凤. 南京医科大学, 2020(07)
- [4]羊膜-纤维蛋白胶泥的制备及其治疗兔重度眼表碱烧伤的实验研究[D]. 李楠钰. 昆明医科大学, 2020(02)
- [5]吡柔比星通过诱导细胞凋亡和自噬抗兔结膜纤维化[D]. 徐丽娟. 浙江大学, 2020(01)
- [6]角膜缘基质微环境细胞对体外培养的口腔黏膜上皮细胞的影响[D]. 段朝野. 华中科技大学, 2019(03)
- [7]体外培养角膜缘干细胞重建眼表的实验研究[J]. 詹冬梅,杨红燕,哈玲芳,韩树梅. 宁夏医学杂志, 2017(04)
- [8]骨髓间充质干细胞及其培养上清液对小鼠角膜碱烧伤修复作用的实验研究[D]. 赵云. 天津医科大学, 2016(03)
- [9]羊膜对角膜损伤的治疗作用及其机理研究[D]. 郭庆. 哈尔滨工业大学, 2017(01)
- [10]兔骨髓间充质干细胞膜片对角膜化学烧伤的治疗作用与机制研究[D]. 袁晔. 第二军医大学, 2015(07)